CD97亚型在胃癌细胞中的作用及其机制的研究

目的：CD97与胃癌的侵袭性密切相关,是潜在的胃癌基因治疗靶点之一。本研究对CD97亚型进行深入研究,更好地了解它在胃癌细胞侵袭力改变中的作用及其机制。 方法：本实验首先通过RT-PCR及western blot对不同胃癌细胞株的CD97各亚型表达及总蛋白进行检测。随后分别以pcDNA3.1及pGCsilencer质粒作为载体,分别重组构建CD97各亚型的过表达质粒及CD97亚型RNA干扰质粒。通过转染胃癌细胞得到CD97亚型过表达克隆和CD97亚型RNAi克隆,并通过MTT、soft agar、invasion assay、刮痕试验等观察其对胃癌细胞生物学行为造成的影响。此外,进一步研究可能的细胞骨架信号通路,探讨CD97亚型影响胃癌细胞侵袭性的作用机制。结果：①不同胃癌细胞株的侵袭力水平与CD97总蛋白表达水平并不呈正相关,却和CD97小分子量亚型的表达强度呈正相关；②CD97小分子量亚型过表达克隆pcDNA3.1-CD97/EGF1,2,5在其小分子量亚型表达升高的同时,其侵袭性及迁徙能力亦明显增加,而大分子量亚型过表达克隆pcDNA3.1-CD97/EGF1-5的侵袭性及迁徙能力却明显下降；③CD97亚型RNA干扰克隆pGCsilencer-CD97/EGF 1,2,5 RNAi的侵袭性明显下降,细胞活性和迁徙能力却显著上升,而pGCsilencer-CD97/EGF1-5 RNAi克隆侵袭性、细胞活性和迁徙能力均下降,其中侵袭性的下降较小分子量亚型干扰克隆更为明显；④Cdc42及stathmin在BGC-CD97/EGF1,2,3,4,5克隆的表达中较对照组明显升高,而在BGC-CD97/EGF 1,2,5克隆中明显降低；⑤Rac、LIMK1及phosphoryl ated-cofilin在BGC-CD97/EGF1,2,5克隆中的表达较对照组明显升高；⑥α-tubulin/acetylated-tubulin的比例在BGC-CD97/EGF1,2,3,4,5克隆中明显降低而在BGC-CD97/EGF1,2,5克隆中升高。 结论：研究首次发现CD97总蛋白的表达强度和胃癌细胞侵袭性并不呈正相关,并在此基础上提出胃癌细胞侵袭性主要和CD97小分子量亚型表达强度呈正相关；CD97大分子量亚型表达强度可能和细胞的活性及迁徙能力呈正相关的观点。此外,本研究还发现CD97亚型主要通过Cdc42-Stathmin-tubulin、Rac-LIMK 1-cofilin的信号通路以及对tubulin的乙酰化修饰从而对胃癌细胞的侵袭性产生影响。为CD97作为胃癌的新兴标志物及基因治疗靶点奠定更为坚实的理论及实验基础。