油茶遗传多样性及遗传性状的RAPD分析

应用RAPD标记技术，分析油茶杂优闽1等32个品系及10个龙眼茶农家品种的遗传多样性及杂优闽l等32个品系的果油率、单株结实量等遗传性状与RAPD标记的相关性。结果表明：（1）用改进的CTAB法提得的油茶基因组DNA分子大小约为48kb，OD260／OD280比值在1.8～2.0之间，平均得率为328 ng／mg·Fw。DNA经核酸内切酶消化，表明其质量能满足分子生物学实验的要求。（2）分别测试了Mg2+、引物、dNTP、DNA模板浓度和Taq DNA聚合酶用量对RAPD反应结果的影响，筛选并确定了油茶RAPD分析的最适反应体系：在25μ1 PCR反应体积中，含20ng模板DNA，2.5mmol／L MgCl2，0.2mmol／L dNTP，0.3μmol／L引物，1U Taq DNA聚合酶。相应的扩增程序为：94℃预变性180s；94℃变性60s，37℃退火90s，72℃延伸120s，反应40个循环；最后在72℃延伸5min。（3）用RAPD标记技术从78个随机寡核苷酸引物中筛选出19个引物，对32个油茶杂优品系及10个龙眼茶丰产农家品种计42个样本的遗传多样性进行分析。结果表明，供试的42个样本多态性条带百分率（PPB）为59.12％；各位点Shannon信息指数和Nei氏遗传多样性指数平均值分别为0.2516和0.1653；样本间的无偏遗传距离值为0.0516～0.4839，平均值为0.1780；遗传相似系数变化范围在0.6164～0.9497之间，平均值为0.8388。表明供试的42个样本遗传多样性水平较低。计算结果还表明，杂优闽1等32个品系间的遗传距离较小，平均值为0.1519，10个农家品种间的遗传距离也只有0.1570，而32个杂优品系与10个农家品种间的遗传距离则较大，达到0.2111。（4）油茶杂优闽1等32个品系以Nci氏（1978）无偏距离进行聚类分析，在0.14处分成5类（区），各区果油率平均值从高到低的排序为A＞E＞B＞D＞C。果油率较高的品系大都位于A区，果油率较低的多集中在C区，说明油茶果油率这一性状可能与RAPD标记的某些基因有连锁关系。而各品系的单株结实量与RAPD标记间无明显相关。