基于“黄芩清肺汤”的黄芩栀子饮片炮制配伍物质基础研究

本论文研究内容来源于国家自然科学基金面上项目“基于黄芩清肺汤的黄芩、栀子饮片炮制配伍示范性研究”。黄芩清肺汤主要由黄芩、栀子两味饮片组成,源于元朝罗天益的《卫生宝鉴》。生黄芩有清热燥湿、泻火解毒之功；酒黄芩清上焦湿热,酒制引药上行；生栀子泻火除烦,凉血解毒,但胃弱者易致呕吐；焦栀子擅于凉血止血。由于各地用药习惯的差异,黄芩清肺汤的处方用药饮片存在着较大的差异。根据黄芩清肺汤的临床功效以及该方中黄芩、栀子饮片的配伍应用情况,选择黄芩2种饮片一生品、酒炙品以及栀子2种饮片一生品、炒焦品两两交叉配伍成4个配伍方进行比较研究,通过HPLC指纹图谱、LC-MS、IR、以及多成分定量比较分析,对黄芩栀子不同饮片配伍前后的黄酮类、环烯醚萜类、二萜色素类、酚酸类等化学成分变化进行了较为系统的研究,探讨黄芩清肺汤不同饮片配伍方的物质基础变化规律,以揭示黄芩、栀子不同饮片炮制配伍的科学内涵,为临床合理规范的应用饮片提供科学依据。具体内容如下：第一章文献研究围绕课题研究内容,查阅了黄芩和栀子的相关文献研究资料,对黄芩栀子饮片配伍、黄芩、栀子的化学成分,药理作用等进行了系统的归纳分析与总结。第二章黄芩栀子不同饮片配伍样品的制备收集道地产区的黄芩、栀子饮片,依中药炮制规范在安徽沪谯中试炮制,批量制备成生黄芩和酒黄芩,生栀子和焦栀子,经正交试验设计,制备实验用饮片配伍样品。第三章 栀子中环烯醚萜苷类成分快速分离和纯化栀子醇提物经大孔树脂吸附粗分,结合中压制备(MPLC)分离和HPLC制备色谱分析等技术,从栀子30%乙醇洗脱部位中快速分离纯化了6个环烯醚萜类成分,为后期黄芩栀子饮片配伍的定量研究提供对照品。第四章 黄芩栀子不同饮片配伍的HPLC指纹图谱研究及主要色谱峰指认以多重指纹图谱分析法,研究建立了黄芩栀子饮片4种配伍方式、2个检测波长(254nm,440nm)下HPLC指纹图谱分析方法及其对照指纹图谱；结果显示,4种配伍方式在254nm下的HPLC整体图貌差异不显著,在440nm下的HPLC图谱差异较大。以对照品比对法分别指认了254nm下20个色谱峰,在440 nm下指认出4个二萜色素类成分,初步揭示了黄芩栀子饮片配伍的化学成分组成及其变化规律。第五章黄芩栀子饮片配伍的LC-MS鉴别研究以液相色谱-电喷雾质谱(HPLC-ESI-MS)联用技术的方法,通过正负离子模式、主要碎片信息,对黄芩栀子不同饮片配伍前后主要成分进行鉴定归属,结果推断了4类共32个化合物质谱信息,包括环烯醚萜苷类9个、二萜色素类6个、黄酮苷类16个、有机酸类1个。另外推测了3个化合物的分子量。为深入阐释黄芩栀子不同饮片配伍的化学成分变化规律提供科学依据。第六章黄芩栀子饮片配伍主要成分定量比较研究以HPLC法建立了2个检测波长同时测定了黄芩栀子饮片配伍24种成分的含量。254nm下结果显示,与黄芩、栀子单煎饮片相比,黄芩栀子饮片配伍中环烯醚萜类成分及黄酮总苷类成分溶出总量更多,这两类成分整体上呈上升趋势,其中环烯醚萜成分上升较明显。在440m下不同炮制品种配伍差异较大,色素类成分主要由栀子贡献,色素的比例、种类在很大程度上取决于生栀子和焦栀子的配伍方式。与栀子单煎饮片相比,配伍后总色素含量上升,生栀子中色素类成分经高温炒焦过程后含量和比例产生巨大变化,通过对主成分变化规律的总结初步阐明了不同炮制品种的黄芩栀子饮片配伍物质基础内涵变化。第七章基于红外光谱技术的黄芩栀子饮片配伍研究以红外光谱的一级图谱、二阶导数、二级图谱差异以及特征基团的振动产生的吸收峰的区别,对比研究黄芩栀子饮片水煎液配伍前后主成分的变化规律,并辅佐验证LC-MS对成分的推测。研究结果显示黄芩栀子饮片配伍的红外吸收图谱并不是两者红外图谱的简单叠加,推测为配伍前后官能团的化学环境有所改变所致。第八章结果与讨论本论文通过HPLC旨纹图谱比较分析和主要色谱峰的指认,初步表征了黄芩栀子不同饮片配伍的整体化学物质变化情况；结合LC-MS法鉴定了组方中4类共32个化合物的结构信息；通过红外色谱定性鉴别了不同配伍方式的红外吸收变化情况；以HPLC法定量分析了黄芩栀子饮片配伍4类共24个成分(黄酮类10个、环烯醚萜苷类9个、酚酸类1个、二萜色素类4个)含量变化情况；初步揭示了黄芩栀子饮片配伍的化学成分组成及其变化规律,基本阐释了黄芩栀子饮片配伍的物质基础内涵,为基于生熟异用建立黄芩、栀子不同饮片的质量评价标准及其临床合理规范应用提供了有益的参考和可靠线索。