具有抗氧化活性的新型有机硒化合物拮抗顺铂肾毒性机理研究

顺铂是目前应用最为广泛的抗肿瘤药物之一，但其毒副作用是临床应用的瓶颈，因此寻找顺铂肾毒性的拮抗剂具有重要的意义。研究发现氧化损伤是顺铂肾毒性的关键机制之一，因此寻找具有抗氧化活性的物质并研究其对顺铂的肾毒性的拮抗作用及机制具有重大的应用前景及开发价值。硒化合物具有广泛的生物学功能，研究表明多种有机硒化合物都具有较强的抗氧化能力，因此本研究竭力寻找拮抗顺铂肾毒性的强抗氧化活性有机硒化合物，并研究其拮抗顺铂肾毒性深入的作用机理。本研究以AAPH应激的血红细胞为氧化模型，研究有机硒保护血红细胞溶血的保护作用及机制，并确定待测化合物的抗氧化活性。筛选出具有强抗氧化活性的有机硒将其作用到HK-2肾毒性模型中，研究其对对肾毒性的拮抗机理。实验结论如下： 1. ABTS·+自由基清除实验显示含硒别藻蓝蛋白（Se-APC）具有很强的体外清除自由基能力。含硒别藻蓝蛋白Se-APC能通过抑制细胞中ROS的累积而阻止由AAPH诱导的血红细胞氧化损伤，继而抑制细胞溶血。同时，能降低由AAPH诱导的血红细胞中GPx抗氧化物酶活性及GR还原酶活性的升高，同时能降低MDA的积累，逆转AAPH诱导的GSH含量的下降，并由此维持细胞的正常的氧化还原状态从而拮抗AAPH诱导的氧化损伤。此外，Se-APC对CuCl2诱导的血清的氧化损伤也能起到明显的缓解作用。这些结果说明Se-APC具有较强的抗氧化活性。本实验建立的细胞模型为模拟体内条件检测化合物抗氧化活性供了行之有效的方法。 2.硒代半胱氨酸衍生物DSePA具有强的抗氧化活性。在对顺铂诱导的HK-2细胞的保护实验中发现，DSePA能有效地抑制细胞内ROS的累积及维持Akt信号通路从而抑制顺铂诱导的肾毒性。体内常规还原性物质GSH具有类似DSePA的保护效果。流式细胞分析的结果表明GSH能有效地降低顺铂诱导的凋亡细胞比例降低，Western blotting的结果发现Caspase-3激活量降低，PARP的切割减少。此外DSePA还能阻碍顺铂诱导的线粒体及死亡受体细胞凋亡通路。荧光染色法的结果表明DSePA能阻碍顺铂诱导的线粒体膜电位的降低及线粒体含量的减少，同时Western blotting的结果表明DSePA能调控顺铂诱导的Bcl-2家族蛋白表达量的变化，并能降低顺铂诱导的Caspase-8/-10的激活量。更重要的一点是，DSePA在拮抗顺铂肾毒性的同时并不会影响其对肿瘤细胞生长的抑制作用，这在肿瘤的治疗过程中是一个相当关键的因素。