枇杷种质离体保存的初步研究

本研究以枇杷（Eriobotrya japonica Lindl.）为材料，进行了种质资源保存的初步研究。包括枇杷快繁体系的建立；枇杷试管苗常规离体保存各影响因子的研究；枇杷种质资源低温保存和枇杷种质资源的超低温保存研究几个方面。主要结果如下： 1、枇杷快繁体系的研究 建立并比较了以茎尖、幼胚、成熟胚为材料的几种枇杷快繁途径。以茎尖为材料的快繁途径中，用饱和漂白粉上清液消毒20min，再用1g·L-1的HgCl2消毒8rain后接种，可大大降低污染率，外植体成活率达75％，并能有效地抑制枇杷茎尖培养中经常出现的褐化现象。培养基MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L可比较有效地促进芽苗形成。在幼胚和成熟胚培养中，培养基MS+BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L有利于幼苗的形成并可以促进腋芽的增生。当小苗长至一定高度后，转移至激素含量降低的培养基MS+BA0.5mg/L+NAA0.1-0.2mg/L，则促进枇杷幼苗的增殖，根系正常生长。 2、枇杷种质常规离体保存 在试管包扎物选择实验中，发现白纸加聚丙烯塑料薄膜和锡箔纸作为封口材料较为合适。棉花、橡皮塞等作为封口材料明显不利于枇杷的种质保存。 低强度的光照处理有利于种质保存，但当光照强度＜700Lx时，对枇杷种质保存不利。 浓度为2-5mg/L的生长抑制剂多效唑(PP333)有利于枇杷种质保存，与对照组别（不加抑制剂）相比较，植株高度、新生叶片数目等方面明显受到抑制。高浓度的甘露醇（＞5g/L）不利于枇杷种质的离体保存，对枇杷试管苗会造成毒害，5g/L的甘露醇有较好的保存效果。矮壮素（CCC）在枇杷试管苗种质保存中的合适浓度为25mg/L左右。脱落酸（ABA）的适宜浓度为10mg/L左右， 三种生长抑制剂中，多效唑在枇杷试管苗种质保存中效果最为理想，5mg/L的浓度条件下，品种山里本保存8个月后存活率仍在90％以上。 3、枇杷种质低温保存 低温有利于枇杷种质的离体保存。在11±0.5℃的低温情况下，大部分品种都有很好的保存效果：生长表现因子植株高度、叶片数目等明显低于对照组别（25±1℃）。半年后存活率大部分品种都在70％以上。实验中也发现，个别品 种（香酣）在此低温条件下保存效果不理想，可能与个别品种的抗寒性有关。 4、超低温保存初步研究 采用干冻化法对批把花粉超低温保存进行了研究。结果表明：花粉的含水 量是决定批把花粉超低温保存成败的关键因素，30％左右的含水量能够保证超低 温保存后花粉的活力；解冻温度及方式对超低温保存后花粉的存活力没有明显 影响。干冻后染色及萌发检验表明，冻后花粉的生活力与未超低温保存花粉相 比没有明显降低；萌发率可达听％。 茎尖超低温保存研究发现，二步化冷冻法超低温保存的批把茎尖可获得愈 伤组织。 脱水至一定程度的幼胚超低温保存后培养获得了2株试管苗。