蜜环菌发酵液多糖的化学成分及生物活性研究

蜜环菌[Armillaria mellea (Vahl ex Fr.) Quel]属于口磨科(Tricholomataceae)蜜环菌属[Armillaria(Fr.)Staude.],药食两用真菌。蜜环菌多糖具有抗辐射、促进造血、抑制肿瘤生长、调节免疫等功能[1-6]。蜜环菌化学成分的研究主要集中在子实体、菌索、菌丝体等方面,而对于发酵液则研究较少。为了发掘蜜环菌的有效成分,进一步阐述蜜环菌多糖的药用价值,充分利用蜜环菌多糖资源,本研究从蜜环菌发酵液中提取分离、纯化多糖,获得均一多糖,研究其结构,为进一步研究和利用蜜环菌发酵液奠定实验基础。 主要的研究内容总结如下： (1)对蜜环菌发酵液中多糖的提取工艺进行了优化,以蜜环菌多糖的提取率为衡量指标。在单因素试验基础上,采用正交试验法进行优化选择。最佳提取工艺为：蜜环菌发酵液与水以1：3的比例进行混合,搅拌提取3次,每次6h。 (2)采用乙醇沉淀法对蜜环菌多糖进行分离,确定适宜的醇沉浓度,获得蜜环菌发酵液中的粗多糖。 (3)对上述粗多糖采用进行进一步的分级分离,采用葡聚糖凝胶柱色谱法对粗多糖B进行分离,得到三种均一多糖,分别是AMFP-Ⅰ、AMFP-Ⅱ和AMFP-Ⅲ;分子量、分子量分布及纯度检查采用HPLC法,应用多糖专用GPC软件处理数据,结果三种均一多糖均为峰型对称且很锐的色谱峰,峰位分子量分别为812939D,596217D,273210D；单糖组成采用PMP柱前衍生化法测定,三种均一多糖均主要由Man、Rha、GalUA、Glc、Gal、Xy1六种单糖组成；均一多糖的结构研究通过部分酸水解、甲基化、紫外、红外、核磁共振等相关实验对三种均一多糖的结构做初步解析。 (4)对蜜环菌多糖进行治疗血管神经痛的生物活性研究。采取化学及热刺激法、小鼠断头法,判断发酵液中大分子成分的镇痛、对脑缺血的保护作用；并观察在小鼠乏氧条件下蜜环菌多糖部分的抗乏氧作用。