去卵巢骨质疏松大鼠BMSCsRunx2、PPAR-γ基因表达的研究

目的:观察经雌激素、葛根素、白藜芦醇对去卵巢骨质疏松大鼠在体干预后,分离培养的骨髓间充质干细胞(BMSCs)Runx2、PPAR-γ基因的表达。方法:1.选用65只3月龄SPF级健康雌性Sprague-Dawky(SD)大鼠随机分为五组,分别为:假手术组(SHAM)、雌激素替代治疗组(ERT)、葛根素组(PUE)、白藜芦醇组(RES)、去卵巢组(OVX),每组13只。除假手术组外其余四组大鼠采用双侧卵巢切除法复制大鼠绝经后骨质疏松症模型,术后1周后给予药物干预10周。2.ELISA法检测大鼠血清骨碱性磷酸酶(BALP)、血清骨保护素(OPG)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRAP-5b)、I型胶原羧基末端肽(CTX-I);外周定量计算机断层扫描(pQCT)测量大鼠右侧股骨骨微结构的相关参数。3.分离培养去卵巢大鼠BMSCs,采用流式细胞仪检测细胞表型进行细胞鉴定;RT-PCR法检测BMSCs成骨调控基因Runx2、成骨标志基因骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、成脂调控基因过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)和成脂标志基因脂蛋白脂酶(LPL)的表达。结果:1.实验前各组大鼠体重无明显差异,至实验结束时有不同程度增加。OVX组大鼠药物干预后4周、10周体重与同龄SHAM组比较分别增加3.9%、8.4%(P<0.05);PUE、RES组大鼠体重与OVX组相比差异不大(P>0.05)。2.OVX组松质骨骨矿含量及骨密度较SHAM下降(P<0.05);PUE、RES、ERT组松质骨骨矿含量及骨密度与OVX组比较有不同程度的升高(P<0.01);ERT、PUE、RES、OVX四组皮质骨骨矿含量以及骨密度差异无明显统计学意义。3.OVX组大鼠血清BALP、CTX-I、TRAP-5b较SHAM组有不同程度的提高(P<0.05),ERT、PUE、RES组以上指标较OVX组有不同程度的改善;OVX组血清OPG较SHAM组明显下降,下降比例为36.8%(P<0.01)。4.分离BMSCs后,倒置相差显微镜下发现培养过程中未经干预的去卵巢骨质疏松大鼠来源的BMSCs生长较慢,至第19天左右细胞铺满瓶底;随后进行流式细胞仪鉴定发现BMSCs高表达CD90、低表达CD45。5.取P1代BMSCs行RT-PCR检测,各组间Runx2、BMP-2、PPAR-γ、LPL mRNA表达水平之间差异均无统计学意义;各组BMSCs PPAR-γ基因的表达,除了ERT低于另外四组外,其余各组之间差异均不明显。结论:分离经葛根素、白藜芦醇干预的去卵巢大鼠来源的BMSCs,检测BMSCs Runx2、BMP-2、PPAR-r、LPL mRNA后发现各基因表达无明显差异;提示大鼠BMSCs在去除前期干预因素的影响后,生长虽缓慢,但向成骨以及成脂分化的能力仍保持平衡,可能为自体干细胞治疗绝经后骨质疏松提供理论依据。