大黄酸抗炎作用及机理研究

目的：研究大黄中主要有效成分大黄酸(Rhein)对细菌脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞一氧化氮(NO)生成及相关炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的影响,并探讨其可能的机制。 方法：采用硝普钠释放NO模型研究大黄酸对NO的清除能力。建立LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应模型。采用Griess试剂法测定大黄酸对NO释放量的影响；应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析iNOS mRNA表达改变；采用免疫蛋白印记(Western blotting)法测定iNOS蛋白表达变化及IκB-α蛋白的降解和p65的核转位；采用流式细胞术测定CD14和TLR4表达的变化；采用酶联免疫法(ELISA)测定IL-1β、IL-6和TNF-α的水平变化。 结果：大黄酸有微弱直接清除NO能力,可显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放,并呈良好的剂量和时间依赖关系。大黄酸抑制iNOS活性,下调LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS mRNA水平和iNOS蛋白表达,抑制LPS诱导的IκB-α降解、促进p65核转位从而影响NF-κB通路,抑制LPS诱导的胞膜CD14蛋白表达,不影响胞膜TLR4/MD-2复合物表达的改变,上调LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平。 结论：大黄酸抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放,与其抑制iNOS活性及下调iNOS含量直接相关。而iNOS量的改变是通过其阻碍LPS诱导的CD14表达、IκB-α降解和p65核转位,进而抑制下游iNOS mRNA及蛋白(iNOS)表达来实现的,对TLR4/MD-2表达无影响。而大黄酸上调LPS致RAW264.7细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的水平对其在抗炎或免疫作用值得深入研究。