姜黄素增强华蟾素诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的研究

姜黄素和华蟾素两种天然提取物单独使用的抗肿瘤作用都有过研究，但是两药联合作用于人宫颈癌Hela细胞尚未见报道。本文利用原子力显微术（AFM）、酶标仪、激光共聚焦显微镜（LSCM）、倒置荧光显微镜、流式细胞仪（FCM）等手段来探讨姜黄素对华蟾素的增强抗肿瘤作用以及利用超高分辨率观察细胞表面超微结构。主要得到以下创新点： 1、加入姜黄素以后，两药联合作用于宫颈癌Hela细胞，细胞皱缩变圆，高度降低，细胞边缘变得模糊、染色体断裂、细胞核破碎，呈现出凋亡特征。倒置荧光显微镜显示细胞脱离基底，密度明显减小。Hela细胞的增值抑制率和凋亡率明显增加，分别增加了3倍，呈现剂量依赖性。PI染色显示细胞被阻滞在S期，阻碍了细胞的DNA复制，使得细胞无法正常增值分裂。细胞内活性氧（ROS）总量增加了2倍，钙离子(Ca2+)浓度增加了65.34%。线粒体膜电位下降到15%。细胞内活性氧水平升高，引起氧化应激水平紊乱，细胞膜电位去极化，启动钙离子内流以及内质网释放钙离子，使得细胞内钙离子浓度增加。同时，线粒体通透性转换孔开放，引起线粒体膜电位下降，最终导致肿瘤细胞不可逆凋亡。 2、作用48h以后，激光共聚焦显微镜荧光成像显示，原来规则的沿细胞长轴呈现丝状分布的细胞骨架解聚成颗粒状，骨架发生重排。流式细胞仪定量检测结果表明，细胞内的F-actin表达量降低为原来的63.66%，定性定量结果一致，推测原因是纤维状的F-actin解聚为游离态的颗粒状的G-actin，抑制了细胞的迁移能力。 3、加入姜黄素以后，联合作用组CIN25/CUR4、CIN25/CUR8细胞表面粘附分子E-cadherin和黏着斑蛋白vinculin表达量都显著升高。相对于华蟾素单独作用相比，E-cadherin的表达量升高了106.87%；vinculin的表达量则升高了348.31%。这说明姜黄素和华蟾素联合作用导致细胞与细胞以及细胞与基质之间的连接作用明显增强，从而抑制了肿瘤细胞的迁移。 综上所述，本文提供了一种新型治疗宫颈癌的方案。同时，研究证明姜黄素能够增强华蟾素的诱导凋亡作用并且对机制进行了探讨。我们利用AFM对早期 细胞凋亡形态和超微结构进行可视化观察，为研究药物与细胞之间的相互作用提供有力手段。