葛根素对经IL-1β诱导的大鼠颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响

目的与意义：近年来,颈椎病的发病率不断上升,且发病年龄呈现低龄化趋势,对患者的生理心理造成多方面的影响,严重影响患者正常的工作和生活。本实验通过研究葛根素对经炎性因子IL-1β诱导的大鼠颈椎间盘纤维环凋亡细胞中凋亡调节因子Bcl-2与Caspase-3的影响,探索其延缓椎间盘退变、防治颈椎病的作用机制,并为临床使用中药葛根治疗颈椎病提供实验基础与理论依据。 方法： 1.体外分离培养大鼠颈椎间盘纤维环细胞,稳定传代。 2.使用甲苯胺蓝染色与免疫细胞化学染色法对细胞进行鉴定。 3.WST-1及流式细胞术检测不同浓度的IL-1β对大鼠颈椎间盘纤维环细胞的影响,选取适宜的干预浓度。 4.WST-1及流式细胞术检测不同浓度葛根素对经IL-1β诱导凋亡的大鼠颈椎间盘纤维环细胞的影响。 5.采用Western Blot法从蛋白水平检测葛根素干预经IL-1β诱导的大鼠颈椎间盘纤维环凋亡细胞中Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达。 结果： 1.培养的第3代细胞甲苯胺蓝染色呈异染性,Ⅰ型、Ⅱ型胶原免疫组化染色均可见阳性表达,表明培养的第3代细胞具有椎间盘纤维环细胞的表型特点,可以用于后续实验。 2.IL-1β各浓度组与Control组比较具有显著性差异(P<0.05)。不同时段,相同干预组之间比较差异明显(P<0.05)。随着IL-1β剂量与干预时间的增加,凋亡作用愈加明显,但当干预时间增加到一定程度时,IL-1β浓度的提高并没有明显呈现出加强凋亡效果的的作用。 3.中高剂量的葛根素对细胞的保护作用明显,均与IL-1β诱导凋亡组有显著差异(P<0.05)。 4.Caspase-3蛋白表达水平随着葛根素剂量的提高表达减弱；Bcl-2蛋白表达水平在Control组与单纯IL-1β干预组较葛根素干预各组表达较低,具有显著性差异(P<0.05)。 结论： 1.IL-1β能够成功诱导大鼠颈椎间盘纤维环细胞的凋亡,与剂量呈正相关 2.葛根素通过上调抗凋亡因子Bcl-2,下调促凋亡因子Caspase3的蛋白表达水平以阻断凋亡信号的转导,从而保护细胞活性,抑制细胞过度凋亡,延缓椎间盘的退变。 3.葛根素能够有效保护纤维环细胞,抵抗炎症对纤维环的破坏,起到保护椎间盘,延缓椎间盘退变的作用。