补骨脂—肉豆蔻药对醇提部位配伍前后指纹图谱变化及药对成分的定性、定量研究

目的:本文以补骨脂-肉豆蔻药对为研究对象,在文献研究的基础上,运用现代科学技术方法对补骨脂-肉豆蔻药对醇提部位配伍前后的指纹图谱变化及药对成分作定性、定量分析研究,目的在于明确补骨脂-肉豆蔻药对醇提部位配伍前后主要色谱峰的变化,从化学成分角度揭示补骨脂-肉豆蔻药对可能的配伍机制;明确补骨脂-肉豆蔻药对醇提部位所含化学成分信息,为建立补骨脂-肉豆蔻药对的质量控制标准作参考。本实验为含有该药对的现代制剂的成分研究提供参考依据。方法:在总结了补骨脂-肉豆蔻药对国内外研究现状的基础上,本论文主要研究内容包括:补骨脂-肉豆蔻药对醇提工艺研究;补骨脂-肉豆蔻药对醇提部位配伍前后UPLC指纹图谱变化研究;补骨脂-肉豆蔻药对醇提部位化学成分UPLC/Q-TOF-MS定性及UPLC-PDA定量分析研究。1.补骨脂-肉豆蔻药对醇提工艺的研究本实验采用UPLC指纹图谱结合正交试验优选补骨脂-肉豆蔻药对最佳醇提工艺。选择乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数4个因素,采用L9(34)进行正交试验,以UPLC指纹图谱特征峰总面积、补骨脂素、异补骨脂素、去氢二异丁香酚的含量以及干浸膏得率为指标,利用综合评分法对数据进行分析,优选最佳醇提工艺。2.补骨脂-肉豆蔻药对醇提部位配伍前后UPLC指纹图谱变化研究本实验采用UPLC法对补骨脂单味药、肉豆蔻单味药、补骨脂-肉豆蔻药对的醇提部位指纹图谱研究,考察配伍对该药对化学成分的影响。实验在同一条件下建立10批补骨脂单味药、10批肉豆蔻单味药、10批补骨脂-肉豆蔻药对的醇提部位UPLC指纹图谱,建立上述3组指纹图谱各自的共有模式图,并标定各自的共有峰,获得各自的对照指纹图谱。3.补骨脂-肉豆蔻药对醇提部位UPLC/Q-TOF-MS定性及UPLC-PDA定量分析研究为了全面快速地阐明补骨脂-肉豆蔻药对醇提部位的化学组成及其峰的归属,本文利用超高效液相色谱与串联四极杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC/Q-TOF-MS)在相同实验条件下对补骨脂-肉豆蔻药对及混合对照品的色谱图导入UPLC/Q-TOF-MS,结合文献和Mass Lynx工作站Exact Mearch(EMS)软件质谱数据库检索,对已知化合物进行鉴定以及未知化合物的初步鉴定。实验采用UPLC-PDA方法对补骨脂-肉豆蔻药对醇提部位中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂甲素、补骨脂宁、补骨脂乙素、去氢二异丁香酚及补骨脂酚进行定量测定。结果:1.实验优选出补骨脂-肉豆蔻药对最佳醇提工艺:乙醇浓度60%,乙醇8倍用量,提取2次,每次提取1 h。2.补骨脂-肉豆蔻药对配伍前后UPLC指纹图谱的结果提示:补骨脂单味药醇提液共有峰为27个,肉豆蔻单味药醇提液共有峰为10个,而补骨脂-肉豆蔻药对醇提液共有峰却没有37个。来自补骨脂单味药中的27个峰在补骨脂-肉豆蔻药对共有峰中均保留,且27个峰的峰面积平均值均增大。来自肉豆蔻单味药中的10个峰,其中7个峰在补骨脂-肉豆蔻药对醇提液中消失,另外3个峰的峰面积平均值均减小。3.实验根据UPLC/Q-TOF-MS高分辨质谱数据及混合对照品色谱信息对补骨脂-肉豆蔻药对中色谱峰进行指认,总结出补骨脂-肉豆蔻药对中香豆素类、黄酮类、单萜酚类和木脂素类化合物的裂解规律,进一步鉴定、完善7个已知化合物的信息,并初步鉴定出12个未知化合物。实验根据UPLC-PDA对10批补骨脂-肉豆蔻药对醇提部位中7个已知化合物作定量测定。结论:本实验对补骨脂-肉豆蔻药对醇提工艺进行了优选,并对提取工艺的进行验证表明该工艺路线的合理、可行;实验采用UPLC法定量测定、指纹图谱及UPLC/Q-TOF-MS等技术对补骨脂-肉豆蔻药对化学成分进行了系统的研究,能够较全面获取该药对的化合物信息,且实验方法具有简单易行、重现性好等优点。