成骨相关转录因子Osterix启动子调控机制初步研究

目的 在Osterix基因5’端上游区域搜寻BMP-2诱导Osterix转录上调的转录因子潜在核心作用区域，作为后续深入研究的基础。 方法 用Real-Time Q-PCR的方法检测出在转录水平上BMP-2能诱导Osterix的表达上调，然后用PCR的方法，从BAC-RP23-118K10克隆中，扩增出一系列不同长度的Osterix启动子片断，将上述片断克隆到Luciferase报告载体pGL3-Basic Vector中，构建出一系列Osterix启动子缺失突变的报告载体。将构建好的载体和内参pRL-TK共转染至C2C12、C3H10T1／2、和MC3T3三种细胞中，BMP-2诱导48小时后用Dual-Luciferase Reporter Assay System检测不同样品中Luciferase的表达量。通过其表达量的变化，分析其启动子上的调控区域。 结果 BMP-2在转录水平存在对Osterix的调控作用，成功的构建了一系列Osterix启动子缺失突变的报告载体，通过检测，找到了对Osterix基础表达活性有上调作用的三个潜在控制区，即-100～+81、-760～-560和-1254～-1042及两个潜在的BMP-2调控Osterix表达下调的控制区-100～+81和-760～-560。 结论 初步确定了Osterix核心启动子区域，并建立了一个对Osterix转录水平调控的研究平台。