鮟鱇鱼糖胺聚糖的提取、分离和结构研究

本文以鮟鱇鱼骨为原料进行了鮟鱇鱼糖胺聚糖的提取、分离研究，并对分离得到的鮟鱇鱼糖胺聚糖主要组分GAGⅠ进行了理化性质和结构分析。 通过对盐离子强度、盐解条件和醇沉条件的选择，得到了稀碱—浓盐法提取糖胺聚糖的最佳提取条件。最佳提取条件：以鮟鱇鱼骨为原料，用20％NaCl溶液提取，提取液在pH7.8条件下升温盐解除蛋白，随后pH2.5离心除蛋白，最终用70％体积分数的乙醇将糖胺聚糖沉淀析出。 用稀碱—浓盐法分别从鮟鱇鱼头骨和椎骨中提取得到了的糖胺聚糖产品为白色粉末状物质，其得率分别为3.47％、1.24％，氨基己糖含量分别为28.31％、29.60％。红外光谱和电泳分析结果表明鮟鱇鱼头骨提取物和椎骨提取物均为糖胺聚糖且均含两种组分。 分别采用乙酸钙—乙醇沉淀法和氯代十六烷基吡啶法对鮟鱇鱼头骨提取的糖胺聚糖进行进一步分离，结果显示两种分离方法均能将鮟鱇鱼糖胺聚糖分离为两种组分。两种分离方法比较，乙酸钙—乙醇沉淀法简便易操作，且上样量大，更适合鮟鱇鱼糖胺聚糖的分离。 鮟鱇鱼头骨糖胺聚糖经离心沉淀、透析纯化和乙酸钙—乙醇法分级分离，可得到两种组分GAG1和GAG2，分别占总糖胺聚糖的7.56％和92.44％；GAG2又可进一步分为三个级分GAGⅠ、GAGⅡ和GAGⅢ，其中GAGⅠ是主要分级产物，占总头骨糖胺聚糖的55.67％，GAGⅡ和GAGⅢ分别占30.23％、6.54％。 对GAGⅠ的研究表明GAGⅠ为单一组分，纯度为99.12％。GAGⅠ可以被硫酸软骨素ABC酶酶解，且在37℃，2小时可完全酶解。GAGⅠ的理化性质如下：水分含量为8.88％，氮含量为2.86％，氨基己糖和己糖醛酸含量分别为30.12％、31.40％，硫酸基含量为12.69％，硫酸基羧酸基比值为0.97：1。 结构研究表明GAGⅠ是一种硫酸软骨素类物质，分子量为4×10～6。GAGⅠ的单糖构成含β-D-半乳糖、β-D-葡萄糖醛酸和β-D-N-乙酰氨基葡萄糖，摩尔比为0.09：1.19：1。葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖结合构成糖链的二糖重复单位，半乳糖可能存在于糖链与核蛋白连接区域。GAGⅠ的糖链由摩尔比为2.01：1的6-硫酸软骨素二糖（ΔGlcUA-[1→3]-GalNAc-6S）和4-硫酸软骨素二糖（ΔGlcUA-[1→3]=GalNAc-4S）为主要二糖重复单位组成，其结构中还含有少量未知二糖及半乳糖，这些共同构成了GAGⅠ的杂合型糖链。其主要二糖重复单位6-硫酸软骨素二糖和4-硫酸软骨素二糖分别占糖链组成的57.86％和28.78％，GAGⅠ的糖链中含有三种少量未知成分X1、X2、X3，分别占糖链的3.13％、5.00％、5.23％。质谱分析表明X1是含有硫酸基的化合物，X2可能是一种单硫酸软骨素二糖，X3可能是软骨素二糖（ΔGlcUA-[1→3]-GalNAc）。