中药成分对细胞增殖、病毒感染和抗体生成的影响

本研究完成了国家自然科学基金资助项目“中药成分的免疫增强作用和机理及新型免疫增强剂的研究”的部分工作，试验分为五部分： 1．中药成分提取和含量测定 选定黄芪多糖（APS）、当归多糖（CAPS）、板蓝根多糖（IRPS）、淫羊藿多糖（EPS）、蜂胶多糖（PPS）、黄芪黄酮（AF）、淫羊藿黄酮（EF）、蜂胶黄酮（PF）、黄芪皂甙（AS）和人参皂甙（GS）为研究对象。其中，GS购自吉林省亚成制药厂（含量75％），其余九种中药成分自备。五种多糖用水煎醇沉法提取，硫酸蒽酮法测定含量；AF和EF用聚酰胺柱层析法提取，PF用酸碱沉淀法提取，均用芦丁法测定含量；AS用大孔吸附树脂柱层析法提取，TLC分光光度法测定含量。九种中药成分的提取率(g·Kg-1)分别为13.6、14.5、10.0、4.1、36.0、2.1、5.7、11.0、1.0，净含量（％）分别为82.48、77.28、82.94、66.38、51.41、1.39、38.37、46.92、72.88。 2．中药成分对鸡胚成纤维细胞（CEF）安全浓度的测定 将十种中药成分用细胞维持液分别稀释成一系列浓度，以两种方式（与细胞同时和细胞形成单层后）加入到培养的CEF中，通过测定细胞OD值和观察细胞形态学的变化判定安全浓度的范围。结果表明，各中药成分的最大安全浓度(μg．mL-1)分别为APS，1600；CAPS，1200；IRPS，600；AS，150；GS，120；PPS和EPS，40；EF和PF，20；AF，2.5。 3．中药成分对CEF增殖的影响 将十种中药成分分别稀释成安全浓度范围内的五种浓度，分别与CEF同时加入和CEF培养24 h后加入培养板，前者在加药后24、36、48、60、72 h、后者在加药后12、24、36、48、60 h用MTT法测定细胞OD值的动态变化，判定各中药成分对CEF增殖的影响。结果表明，同时加药时，所有成分均显著促进CEF增殖；细胞形成单层后加药时，As、APS、IRPS和PF促进细胞增殖，EPS抑制细胞增殖，其余五种成分在一定的浓度和时间点促进或抑制细胞增殖，且显示一定的量效和时效关系。 4．中药成分对病毒感染细胞能力的影响 将中药成分（浓度同3）和新城疫病毒以三种方式加入（先加入中药后接种病毒、先接种病毒后加入中药、中药与病毒混合感作后加入）到培养的CEF中，通过测定CEF OD值的变化评价各中药成分对病毒的感染细胞能力的影响。结果表明，几乎所有中药成分均能一定程度地抑制病毒感染细胞能力，其作用由强到弱的顺序依次为：AS＞PPS＞EF＞IRPS＞APS、AF＞CAPS＞EPS、PF、GS，且与浓度有一定的相关性；不同中药成分的作用机理不同，或直接杀灭病毒，或 中药成分对细胞增殖、病毒感染和抗体生成的影响 通过提高细胞抵抗力抑制病毒感染，或二者兼有。 5．中药成分对 ND疫苗免疫后抗体生成的影响用新城疫 IV系疫苗免疫雏鸡，试 验 1先免疫，然后分别注射高、低剂量的 CAPS、APS、IRPS、EPS、PPS、EF、PF、AS 和站等丸种中药成分，连续 3 k，分别于免疫后第 7、14、21、35天采血；试验 2 先用药（种类和剂量同试验1）3天，然后首免，两周后二免，于首免后第7、14、21、 28、35和49天采血。用卜微量法监测血清中血凝抑制杭体效价的动态变化．结果表 明，九种中药成分均能不同程度地提高抗体效价，且与给药时间、剂量和免疫次数有 一定的关系．