半枝莲总黄酮成分及抑制肾毒性的研究

半枝莲(Scutellaria barbata D.Don)是我国常用中草药材,唇形科黄芩植物,其味辛、苦,性寒,归肺、肝、肾经,具有清热解毒、利尿消肿、散瘀止血、抗癌的功效,用于治疗疮痈肿毒、蛇虫咬伤、肝炎及肝肿大等症。现代化学与药理研究表明黄酮类化合物是其重要的一类活性成分,半枝莲黄酮具有较强的氧化活性,能够抗菌消炎、清热解毒、抑制脂肪氧化酶等生物活性。本文主要研究半枝莲总黄酮的提取纯化工艺,黄酮类成分的定量分析以及抑制肾毒性作用及机制。全文分如下四个部分：第一部分：半枝莲总黄酮的提取与分离纯化工艺的研究。1、采用超声提取法从半枝莲中获得总黄酮成分,以提取率为考察依据,观察乙醇浓度、液料比、超声时间以及提取次数四种因素对半枝莲总黄酮得率的影响,使用Design-Expert软件设计实验、创建模型,采用响应曲面法分析,最佳实验工艺为：乙醇浓度70.61%,液料比12：1,超声时间52.22 min,提取次数2次。半枝莲总黄酮得率较高,可以达到13.11%。2、利用三种大孔树脂对半枝莲总黄酮静态吸附与解析实验。结果表明AB-8型大孔树脂最适合纯化半枝莲总黄酮。通过动态吸附解析实验,确定了AB-8大孔树脂纯化半枝莲总黄酮的最佳工艺条件为：半枝莲黄酮浓度为5 mg/mL的样品上样流速2BV·h-1,70%乙醇洗脱,洗脱流速为1 BV·h-1,洗脱用量为4 BV,总黄酮的纯度为75.49%,是纯化前的5.74倍。第二部分：半枝莲黄酮类成分的定量分析研究。建立了高效液相法同时测定半枝莲总黄酮中的5种成分(野黄芩苷(scutellarin)、野黄芩素(scutellarein)、木犀草素(luteolin).槲皮素(quercetin dihydrate)、芹菜素(apigenin)),最终确定半枝莲总黄酮中5种有效成分的含量,其中野黄芩苷含量最高,含量超过了10%,最低的为槲皮素,含有近0.6%。本文研究建立的定量分析方法符合要求,可用于半枝莲总黄酮有效部位的质量控制。第三部分：半枝莲总黄酮抑制顺铂肾毒性的实验研究。本文通过分光光度法测定小鼠血清中的BUN、Scr、ALB的含量以及肾脏组织匀浆中MDA与SOD的含量,HE染色观察小鼠肾脏组织的病理变化,探讨半枝莲总黄酮抑制顺铂肾毒性作用。结果表明,低、中、高剂量的半枝莲总黄酮对顺铂所致小鼠肾损伤组织有明显改善,同时可降低血清BUN及Scr含量,升高血清ALB含量,使肾组织中MDA含量下降而使SOD活性升高。实验结果表明半枝莲总黄酮能减轻顺铂所致的肾损伤,其作用机制可能与降低肾组织的氧化损伤的强度有关。第四部分：野黄芩苷与槲皮素对顺铂所致小鼠肾毒性抑制作用的研究。通过小鼠肾肾脏系数与检测血清中尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、白蛋白(ALB)的变化可反映顺铂引起肾损伤,利用生化测定肾组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)可反映其氧化损伤情况。实验结果表明,说明槲皮素与野黄芩苷均有抑制肾毒性的作用,同等条件下,槲皮素的作用效果要好于野黄芩苷。