载脂蛋白E基因多态性与星形胶质细胞损伤后兴奋性氨基酸变化的实验研究

目的探讨载脂蛋白E(apolipoprotein E,蛋白:apoE,基因:APOE)基因多态性与星形胶质细胞损伤后兴奋性氨基酸变化的关系。 方法提取APOE敲除鼠新生2 d内乳鼠大脑皮层星形胶质细胞,并以GFAP-FITC免疫荧光法对所获细胞进行鉴定。脂质体介导重组体pEGFP-N1-APOEε2,pEGFP-N1-APOEε3,pEGFP-N1-APOEε4分别转染入星形胶质细胞中,对转染后的细胞进行RT-PCR鉴定该基因在细胞中的表达,荧光显微镜观察该基因的亚细胞定位及转染效率,Westerblot检测APOE蛋白的表达。制备3种基因型星形胶质细胞划伤模型,采用氨基酸分析仪分别测其中氨基酸的含量,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡。 结果星形胶质细胞划伤后谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)的释放较早,在划伤后30分钟即达到高峰,APOEε4型显著高于APOEε2、APOEε3型在伤后30、60min(P<0.05)。细胞早期凋亡率在24h达到高峰,APOEε4型显著高于APOEε2、APOEε3型在伤后12、24h(P<0.05)。 结论APOE以亚型特异性的方式影响星形胶质细胞创伤后兴奋性氨基酸(Excitatory amino acids,EAAs)的释放,APOEε4携带体可能通过兴奋性氨基酸(EAAs)毒性作用导致急性期伤情加重及不良预后。