海南省CMV黄灯笼辣椒分离物的亚组鉴定

从海南省黄灯笼辣椒(Capsicum chinense)顶死病株上分离纯化得到一个分离物HN-Cc。对该分离物进行扩繁和提纯、病毒粒子形态和寄主超微病理变化的电镜观察、寄主范围和传播实验、血清学实验、外壳蛋白基因测序和分析等一系列研究。结果表明，分离物HN-Cc病毒粒子直径约28-30nm，有“中心孔”结构，球形。病组织超薄切片在电镜下可见病毒粒子向细胞壁靠扰、附着，并通过胞间连丝进入易感细胞，还可见寄主细胞膜增生及叶绿体肿胀、解体等超微病理变化。寄主范围和传播实验结果表明，HN-Cc可侵染4科11种植物，可由桃蚜和种子传播，但不能通过土壤传播。SDS-PAGE电泳检测病毒外壳蛋白分子量约为28kDa。ELISA测定表明，分离物与CMV抗血清呈阳性反应。以分离物HN-Cc RNA为模板，应用RT-PCR方法和特异引物克隆了外壳蛋白(CP)基因。CP基因675bp，编码218个氨基酸。对CP基因序列分析表明，分离物HN-Cc的CP基因核苷酸序列与CMV亚组1分离物的同源性均在92.1％以上，所推导的氨基酸序列同源性在96.3％以上。与GenBank中登录号为AF368192的Pf分离物的CP基因核苷酸序列同源性达到99.7％，所推导的氨基酸序列同源性达到100％，而与亚组Ⅱ分离物的核苷酸序列同源性均低于77.3％，所推导的氨基酸序列同源性均低于80.7％。根据上述的实验证据，将分离物HN-Cc鉴定为黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)，归属于亚组Ⅰ。