广西海带多糖LO1提取纯化与抗血栓作用机制研究

目的 海带多糖是海带中的活性成分,实验研究已经表明其具有多种药理作用。但海带多糖成分复杂,其分子量、糖链长度、单糖的组成和连接形式可因海带的产地不同、提取部位不同及提取分离方法不同而不同,结构不同就会产生不同的药理作用。而且由传统方法提取获得的海带多糖得率较低,限制了其在更大范围中的研究。因而采用不同的方法从不同的海域寻找获得率较高、活性较强的多糖成分,并且进行一系列的药理作用研究是一个极具魅力和挑战性的科研课题。本研究用新的方法从广西海带中纯化得到一个含量较高的多糖组分(L01),对其进行了抗血栓作用及作用机制的研究,为海洋药物的开发利用和抗血栓药物的进一步研究打下基础。 方法 1.采用酶水解—碱消化—醇沉淀法提取海带多糖粗品,脱色精制后用DEAE—纤维素柱层析法纯化,从广西海带中得到一个含量较高的多糖组分L01。采用纸层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳和葡聚糖液相柱层析法鉴定纯度,HPGPC法测定分子量,明胶比浊法测定硫酸根含量,硫酸—苯酚法测定糖含量,紫外分光光度计检测蛋白质,红外分光光度计进行多糖光谱分析。 2.建立多种血栓形成的动物模型,即电刺激颈总动脉血栓形成法、动—静脉旁路血栓形成法和静脉结扎血栓形成法,观察L01对血栓形成的影响。 3.进行体内和体外抗凝血实验和AT-Ⅱa复合物形成实验,观察L01对血