组织培养中秋水仙素诱导葡萄多倍体研究

葡萄是我国重要的果树作物。人工诱导多倍体是培育大粒、无核葡萄新品种的重要途径。本试验结合葡萄组织培养技术，在葡萄体细胞愈伤组织和试管苗两个水平上采用不同的方法对诱导葡萄多倍体进行了研究。 愈伤组织水平上诱导葡萄多倍体试验结果表明：以茎段和叶片为外植体，在附加不同浓度2，4-D、6-BA及秋水仙素的MS、B5培养基上，均可诱导出愈伤组织；愈伤组织的形态特征与外植体的类型、秋水仙素的有无和培养基有关。 对颗粒状愈伤组织进行染色体鉴定结果表明：在加有和不加秋水仙素的培养基上诱导的颗粒状愈伤组织均存在广泛的染色体变异，除正常染色体数为2n=38和2n=4x=76细胞外，还有一些非整倍体细胞。其变异的情况因品种、培养基的不同有所差异。在加有20mg／L秋水仙素并附加1.0mg／L 2，4-D和0.5mg／L 6-BA的B5培养基上可获得加倍率高的愈伤组织；红提较京秀、黑大粒容易获得加倍率高的愈伤组织。 诱导的愈伤组织在MS、B5培养基上均未分化再生成苗，可能与愈伤组织的染色体变异有关，染色体变异越大，分化频率越低；或与诱导分化成苗的培养基、培养条件等因素有关。 试管苗水平上，采用羊毛脂涂抹腋芽、单芽茎段浸泡、脱脂棉覆盖腋芽和秋水仙素加入培养基4种方法进行诱导葡萄多倍体研究，结果表明：除第一种方法外，其余三种均具有诱导加倍效果，诱导处理后的成苗率、诱导率、诱变株的加倍率存在明显差异。 茎段浸泡法成苗率15.7％，诱导率4.1％，诱变株系加倍率31.8％；脱脂棉覆盖法成苗率54.2％，诱导率5.9％，加倍率30.3％：秋水仙素加入培养基中诱导处理，成苗率19.0％，诱导率9.0％，加倍率53.0％，其变动幅度30.0％-66.1％。从成苗率看，秋培法不及浸泡和覆盖法，但从最终的诱导率和诱变株系的加倍率看，秋水仙素加入培养基诱导较为理想，其中以20mg／L秋水仙素加入附加有0.01mg／L 6-BA的MS培养基中包埋腋芽诱导处理两周，诱导加倍效果较好。 不同的品种对秋水仙素的敏感反应不一，诱导加倍效果不同，京秀、黑大粒未获得加倍率超过50％的诱变株系，以红提为亲本获得加倍率分别为66.1％、64.6％的诱变株系H0120-1和H0120-3。两株系经连续3代的继代培养，经根尖和茎尖倍性鉴定，倍性结构基本稳定；与二倍体红提进行形态特征比较，具有多倍体的部分特征特性。气孔鉴定结果表明：诱变株与二倍体红提气孔平均大小无明显差异，但诱变株存在20.8％的特大气孔。H0120-3移栽大田，正进一步鉴定筛选。