小柴胡汤抗抑郁作用及其调节脑内神经递质、神经营养因子和雌性激素的相关机制研究

小柴胡汤首见于《伤寒杂病论》,是治疗少阳证的经典名方。因少阳证症状“胸胁痞满,默默不欲饮食,心烦喜呕”等与现代医学中的抑郁症症状相似,提示小柴胡汤可能具有抗抑郁作用；临床实践中有运用小柴胡汤治疗抑郁症的报道。本课题组前期研究发现小柴胡汤具有增加大鼠脑内单胺类神经递质含量的作用,然而系统地对小柴胡汤抗抑郁作用的实验研究却鲜有报道。本文拟采用多种抑郁症动物模型,对小柴胡汤的抗抑郁作用进行研究,并结合抑郁症发病机制在神经递质、神经营养因子和雌性激素方面的新进展,采用多种药理学手段,从行为、神经生化、蛋白等水平对其抗抑郁作用机制进行探讨。 首先研究了小柴胡汤在小鼠行为绝望模型中抗抑郁作用的量效和时效关系,结果发现小柴胡汤临床等效量(7g/kg)在小鼠悬尾实验和强迫游泳实验中均显著缩短不动时间,1/3临床等效量(2.3g/kg,小鼠；1.7g/kg,大鼠)的小柴胡汤均缩短强迫游泳实中不动时间,并且对自主活动无显著影响,其中给药2周时药效最佳,提示小柴胡汤对大小鼠行为绝望模型均具有抗抑郁作用。为进一步确认小柴胡汤的抗抑郁作用,本文采用药物诱发所致抑郁模型进行了研究。发现小柴胡汤可显著抑制利血平诱导的小鼠体温降低和眼睑下垂症状,并可以显著增加5-HTP诱导的小鼠甩头次数,说明小柴胡汤具有抗抑郁作用且其机制与调节单胺类神经递质水平尤其提高脑内5-HT含量有关。为探讨小柴胡汤抗抑郁的神经递质机制,采用HPLC-ECD方法发现小柴胡汤显著增加行为绝望模型小鼠和大鼠海马、皮层和纹状体内的DA、5-HT及其代谢产物DOPAC和5HIAA的含量,并且降低DA/DOPAC和5-HT/5-HIAA的值；随后采用脑微透析结合HPLC-FLD法检测大鼠海马内氨基酸类神经递质,发现小柴胡汤显著降低大鼠海马透析液中Glu的含量。说明小柴胡汤在行为绝望模型中体现的抗抑郁作用与维持脑内神经递质的稳态有关。 本文采用多种不可预见性温和刺激(Chronic unpredictable mild stress, CUMS)制备大鼠抑郁模型,进行了小柴胡汤抗抑郁药效的确认,并从神经营养因子角度探索小柴胡汤的抗抑郁作用机制。结果发现小柴胡汤显著逆转了CUMS引起的大鼠自主活动的减少、糖水偏爱的降低和摄食量的下降,同时抑制了CUMS引起的大鼠海马内NeuN表达减少、逆转了脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)及其受体TrkB和TrkA表达的下降,并且激活了受体下游PI3K/Akt/CREB通路。说明小柴胡汤抗抑郁作用可能与调节神经营养因子、激活神经营养因子受体下游通路、保护神经元功能有关。 最后本文采用C57BL/6小鼠断乳孤养模型对小柴胡汤的抗抑郁作用及与雌、孕激素调节的关系进行考察,发现小柴胡汤可显著逆转孤养引起的行为绝望状态时间的延长,也显著抑制孤养诱导的小鼠自主活动的增多和攻击行为加剧等焦虑样行为。并且小柴胡汤对孤养诱导的小鼠脑内雌二醇和孕酮的降低具有显著升高作用,同时显著激活雌二醇和孕酮受体下游ERK和CREB通路的相关蛋白,说明小柴胡汤对小鼠孤养模型的抗抑郁作用可能与调节脑内雌、孕激素和受体下游通路有关。 综上,本研究发现小柴胡汤对多种因素所致抑郁症模型的抑郁行为均有改善作用,作用机制可能与维持各类神经递质的稳态、增强神经营养、调节雌、孕激素及其下游信号通路、保护神经元有关。本文揭示了小柴胡汤抗抑郁作用的可能机制,为进一步阐明其抗抑郁作用的靶点研究奠定了基础,也为研发以小柴胡汤为基础的治疗抑郁症的中药复方新药提供了科学依据。