逍遥散抗抑郁有效部位配伍的谱效关系研究

选题依据：抑郁症是一种常见的精神疾病,随着人们生活节奏的加快,社会压力的增大,人们的精神压力也日益增加,导致抑郁症的发病率呈逐年上升趋势,其危害已越来越引起医药卫生界的高度重视。逍遥散具有确切的抗抑郁作用,且有副作用低、复发率低等优势,因而可以从逍遥散中开发理想的抗抑郁新药,但是对逍遥散抗抑郁的药效物质基础的研究尚未见文献报道。众所周知,中药复方具有多组分协同作用的特点,由于中药复杂性所引起的药效物质基础不明确、纯度较低、质量不稳定等诸多问题,一直困扰着中药的应用与现代化发展。因此,阐明逍遥散抗抑郁的药效物质基础,可以为该方的质量控制提供科学依据,同时为从中药中研发疗效更佳的抗抑郁新药奠定基础。“中药谱效关系”是近几年由中医药研究者提出的中药药效物质基础研究新思路,其目的就是通过化学指纹图谱与药效之间的相互关系揭示中药所含的化学成分与药效之间的相互关系,从而阐明与药效相关的化学物质基础。本课题组对逍遥散做了大量的前期研究工作,已经从逍遥散中筛选出了具有明显抗抑郁活性的有效部位,为逍遥散的药效物质基础研究奠定了坚实的基础,然而,这些有效部位中哪些化学成分与药效更加相关目前还不清楚。 目的：基于中医整体观和中药谱效关系研究思路,将课题组前期筛选寻找到的有效部位经配伍优化设计成若干组份,探索逍遥散抗抑郁有效部位配伍的谱效关系,寻找与治疗抑郁症有关的化学成分,初步阐明逍遥散抗抑郁的药效化学物质基础。 方法：采用正交设计,研究逍遥散抗抑郁有效部位X7、X6、X5配伍对行为绝望模型小鼠行为学的影响,考察各部位对药效的影响大小,并进一步考察其配伍对小鼠睡眠时间的影响；设计一系列与原有有效部位X7、X6提取工艺相似的工艺,采用行为绝望模型及HPLC-UV检测手段对有效部位的提取工艺进行优化筛选；采用HPLC-UV建立逍遥散抗抑郁有效部位X7、X6的指纹图谱,并考察其工艺的稳定性；对X7、X6两个有效部位继续进行配伍研究,运用行为学、生化指标等多种药效指标综合评价逍遥散抗抑郁有效部位配伍组份的抗抑郁药理作用,考察单独的有效部位X7、X6及其配伍后的药效差异,并筛选最佳配伍组份；基于多源谱效关系研究思路,应用GC-MS、 UPLC等色谱分析方法对配伍组份进行“谱”分析,结合各配伍组图谱分析结果和药效的关系,应用多种关联分析法(主成分分析、相关分析、多元回归分析等),建立谱效关系,客观准确寻找与治疗抑郁症有关的特征峰,并对从图谱中确定的对药效贡献大的化学成分进行单味药材的归属和定性识别。 结果：1.实验结果显示逍遥散抗抑郁有效部位X7、X6对抗抑郁药效具有显著性影响,部位X5影响无显著性意义,即部位X5对抗抑郁药效贡献较小,予以剔除,从而简化了有效部位的配伍规模。研究结果也表明逍遥散抗抑郁有效部位配伍组份能明显缩短阈剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间,且其睡眠作用机制可能与文拉法辛相似。 2.筛选结果显示硅藻土石油醚工艺所得提取物与原有提取工艺得到的有效部位化学成分相同且抗抑郁活性相当。鉴于硅藻土石油醚工艺其工艺可控性及操作可行性良好,易形成操作规程,因此用硅藻土石油醚工艺代替原有提取工艺。在证明其工艺稳定可靠的同时,本研究采用HPLC-UV建立了逍遥散抗抑郁有效部位X7、X6的指纹图谱。 3.运用行为学、生化指标等多种药效指标成功评价了各配伍组份的抗抑郁药效。实验结果表明不同配伍组份由于所含化学成分含量差异,其抗抑郁药效明显不同,有效部位X6可增强有效部位X7的抗抑郁效果,显示出一定的协同抗抑郁效果,佐证了中药多组分,多靶点作用的合理性,且两有效部位配伍后形成的配伍组份优于单独的有效部位。此外,本研究筛选出了最佳的抗抑郁配伍组份,即当有效部位按生药量计,X7、X6均为92.6g/kg时,抗抑郁作用最佳,研究结果显示其抗抑郁药效接近甚至在一些指标上优于阳性药文拉法辛。 4.基于多源谱效关系研究思路,应用GC-MS、 UPLC等色谱分析方法对由于化学成分含量差异引起药效差异的逍遥散抗抑郁有效部位配伍组份进行了“谱”分析。通过对各项指标的考察表明,本研究建立的分析方法均能达到指纹图谱分析技术要求,所获得的GC-MS、 UPLC指纹图谱能够全面、有效地反应有效部位配伍组份的的内在主要化学成分。与此同时,对指纹图谱中的特征峰进行了峰面积的测定。 5.结合各配伍组份图谱分析结果和药效的关系,应用相关分析、回归分析等多种关联分析法,相互验证,建立谱效关系,寻找并指认出了一些与治疗抑郁症有关的化学成分：在基于GC-MS的谱效关系研究中,共寻找到9个活性成分,其中指认出5个(苍术酮、藁本内酯、棕榈酸、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ),未知化合物4个；在基于UPLC的谱效关系研究中,共寻找到11个活性成分,其中指认出3个(欧前胡素、藁本内酯、白术内酯Ⅱ),未知化合物8个。并对这些化学成分进行了单味药材的归属。分析结果表明有效成分主要来自于柴胡、当归、白术三味药材,进一步证明了该经典名方中柴胡、当归的君药地位以及白术的臣药地位。部分化学成分的抗抑郁活性已被文献所证实,一定程度上证明了本研究所采用的谱效分析方法的客观性与准确性。 结论：1.成功评价了由于化学成分含量差异引起药效差异的逍遥散抗抑郁有效部位配伍组份。通过考察发现有效部位配伍后形成的配伍组份优于单独的有效部位X7、X6,并筛选出了最佳的抗抑郁配伍组份,即当有效部位按生药量计,X7、X6均为92.6g/kg时,抗抑郁作用最佳。本研究为进一步基于有效部位配伍的谱效关系研究奠定了基础,同时,本研究结果为新型抗抑郁组分中药的研发提供了一定的参考价值。 2.基于多源谱效关系研究思路,运用GC-MS、 UPLC等色谱分析方法及多种关联分析法,建立谱效关系,成功寻找到一组抗抑郁的活性成分(欧前胡素、苍术酮、藁本内酯、棕榈酸、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ等),从而为逍遥散的质量控制与药效物质基础研究提供了有价值的参考。 3.基于有效部位配伍的谱效关系的研究思路体现了中药配伍的整体观,为其它中药复方的药效物质基础研究提供了新的方法和思路。