抑郁模型大鼠海马糖皮质激素受体及海马形态的动态研究

目的:采用慢性不可预见性应激(CUMS)方式和社会挫败应激(SDS)方式建立大鼠抑郁模型,动态观察分析并比较在两种应激模式下的抑郁大鼠的行为学变化,以此对两种模型的可行性及价值性进行分析和对照。在此基础上,研究CUMS方式所致抑郁症模型大鼠海马形态和神经元糖皮质激素受体(GR)表达变化,并进一步研究并比较CUMS和SDS方式诱导的抑郁症模型大鼠海马糖皮质激素受体(GR)表达变化以及效应脑区海马形态的变化,为抑郁疾病的相关机制研究提供依据及参照。方法:1.将30只SD雄性大鼠按照行为学评分随机分为3组,即对照组、慢性不可预见性应激组和社会挫败应激组,每组10只。对照组按标准饲养方式喂养,不给予任何处理,两模型组分别按照CUMS方式以及SDS方式给予相应刺激建立大鼠抑郁模型,两种应激方式均应激4周。三组大鼠在实验前及实验开始后的每周末分别对每组大鼠依次行体重测量、糖水偏好百分比试验及Morris水迷宫试验,直到第4周末实验结束。2.利用CUMS方法刺激大鼠建立抑郁模型。取CUMS后2周,4周,6周大鼠海马组织,以非刺激的大鼠海马组织为对照组,利用免疫荧光技术以及RT-PCR技术分别对各组海马神经元GR表达的分布情况和蛋白表达进行检测;MRI和HE染色对海马形态结构的变化进行观察。3.分别用CUMS方法和SDS方法刺激大鼠建立抑郁模型。分别取CUMS组及SDS组应激前及应激后第2周末、第4周末大鼠海马组织,利用免疫荧光技术以及RT-PCR技术分别对两组海马神经元GR表达的情况和蛋白表达进行检测;MRI和HE染色对两组海马形态结构的变化进行观察。结果:1.CUMS和SDS抑郁大鼠模型行为学检测结果:相比对照组,应激第2周末,两应激组大鼠体重、糖水偏好百分比及Morris水迷宫平均潜伏时间均发生明显变化,且CUMS组的行为学变化比SDS组行为学变化明显(p<0.05)。应激第4周末时,SDS组的行为学变化比CUMS组行为学变化显著(p<0.05)2.CUMS抑郁症模型大鼠海马形态和神经元糖皮质激素受体(GR)表达变化结果:(1)激光共聚焦显微镜(CLSM)下观察,GR-DyLight488呈绿光,对照组可见海马CA1区、CA3区及DG区细胞GR表达丰富,荧光强度较高,GR阳性表达细胞形态饱满,胞质胞核显示清楚,细胞排列整齐紧密。与对照组相比,随着应激周龄的增加,处理组海马各区gr的荧光表达强度依次减弱,表达细胞数量减少,形态趋向紊乱。gr免疫反应细胞计数显示处理组海马gr阳性细胞数量明显低于对照组(p<0.01)。rt-pcr结果显示与对照组相比,应激组海马区grmrna表达量明显降低(p<0.01)(2)与对照组相比,应激组海马形态发生显著变化,随应激时间增加增加,应激第2周,4周及6周处理组大鼠海马细胞排列逐渐紊乱,细胞数量逐渐减少,形态趋向不规则。3.cums和sds抑郁症模型大鼠海马神经元糖皮质激素受体(gr)表达变化及效应脑区海马区形态改变结果:(1)激光共聚焦显微镜(clsm)下观察,应激前可见海马dg区细胞gr表达丰富,荧光强度较高,gr表达细胞排列紧密有序,形态饱满。随着应激周龄的增加,应激第2周末时cums组及sds组海马dg区gr的荧光表达强度均表现减弱,表达细胞数量减少,形态趋向紊乱,且cums组相比sds组变化更为明显;应激第4周末时cums组及sds组海马dg区gr的荧光表达强度进一步减弱,表达细胞数量明显减少,形态更加紊乱,但sds组较cums组变化程度更为显著。gr免疫反应细胞计数与rt-pcr检测海马组织grmrna变化均呈现一致的表达变化趋势((p<0.05)。(2)mri及海马解剖实体图及海马he染色图片显示cums组和sds组海马形态均发生明显变化,随着受试大鼠周龄增加,应激第2周末及第4周末两组均表现出大鼠海马细胞排列逐渐紊乱,细胞数量逐渐减少,形态的不规则,且相比cums组,sds组变化进展亦表现先慢后快的趋势。结论:1.sds和cums方法均能有效地模拟抑郁症的核心症状,且两种抑郁模型行为学的改变具有持续性,相比cums模型sds模型更能使动物抑郁行为达到一种持久而稳定的理想效果,为动态观察抑郁症大鼠生理生化的改变提供了更可靠更客观的选择对象。2.cums模型诱导抑郁模型大鼠海马神经元内gr表达减少,从而引起大鼠海马神经元受损。3.cums和sds方式诱导的抑郁模型大鼠表现不同变化节奏的海马dg区gr表达减低以及海马形态变化,sds模型相比cums模型更能使动物抑郁行为达到一种持久而稳定的理想效果,故结合不同类型应激方式下来探讨抑郁症海马结构及gr的表达变化,才能更进一步对不同病因下抑郁症的发病机制进行深入的研究和发现。