糖基化终产物对视网膜VEGF及Flk-1表达的影响

目的 糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是常见致盲眼病之一,其发生和进展与血糖水平、疾病病程、遗传及控制情况等多种因素有关。对于DR的发病机制,目前的研究主要集中在高血糖、多元醇代谢异常、蛋白质非酶糖化、血流动力学异常、细胞因子等方面。长期高血糖引起机体蛋白质非酶糖化所形成的糖基化终产物(AGEs)大量堆积是导致DR发生的主要原因。DR的实质是进展性的微血管病变,新生血管形成是其特征性的病理改变。在血管新生的过程中,血管内皮生长因子(VEGF)通过其受体起重要作用。本实验通过观察AGEs对健康大鼠视网膜VEGF及其受体(flk-1)表达的影响,探讨AGEs与VEGF及flk-1之间内在关系,以及AGEs在DR发病过程中的重要作用。 方法 1、体外制备AGEs,BSA50g/l和D-glucose 0.5mol/1溶于0.2mol/1 PH 7.4 PBS中。对照组不含D-glucose,余同。37℃温育三个月。三个月后取出,透析。经荧光分光光度法鉴定。 2、20只SD大鼠随机分为AGEs实验组和BSA对照组,每组10只。分别于鼠尾静脉以40mg/kg·d的剂量注射AGEs和BSA,每日1次,连续2周。 3、二周后处死大鼠,视网膜行免疫组织化学染色,计数视网膜VEGF及flk-1的表达。 结果 1、体外孵育产物经荧光分光光度法鉴定,实验组产物荧光值为52.67U/mg,对照组产物荧光值为5.65U/mg。 2、大鼠血糖平均值,AGEs组[(5.153±0.148)mmol/1]与BSA组[(5.130±0.112)mmol/1,P＞0.05]无统计学差别。 3、视网膜节细胞层和内核层出现的棕黄色染色的VEGF阳性细胞数,AGEs组[(31.277±6.963)个]较BSA对照组[(20.986±5.838)个,P＜0.05]多。 4、视网膜节细胞层和内核层出现的淡黄色染色的flk-1阳性细胞数,AGEs组[(2.175±0.677)个]较BSA对照组[(1.756±0.493)个,P＜0.05]多。 结论 1、AGEs可作为独立危险因素参与DR的损害过程。 2、AGEs与VEGF及flk-1正相关,它们可能共同参与DR的发展。