痛泻要方调控TGF-β/SMAD4信号通路干预结肠炎相关性结肠癌的实验研究

目的结肠癌作为我国常见恶性肿瘤近年来有上升趋势,炎症性肠病患者有很高的几率进展为恶性结肠癌。在防止炎症进一步发展为癌症的过程中,中医药有较好的预防效果,但是在“炎-癌”转化的过程中涉及到多条信号通路的参与,对中医药干预其的相关机制不明确。通过建立相关疾病模型并对主要相关细胞因子进行检测,对中医药干预结肠炎相关结肠癌的机制进行初步探讨。方法通过AOM联合DSS的方法成功复制出结肠炎相关结肠癌动物模型,采用痛泻要方高、中、低剂量进行灌胃。实验过程中,我们以小鼠疾病活动指数和定期称重来判断一般情况,我们在一定的时间点随机选取小鼠处死后取材,测量结肠长度,HE染色镜下观察炎细胞浸润、肠道隐窝损伤、不典型增生以及癌变情况,免疫组化法观察小鼠结肠TGF-β1、SMAD4表达,ELISA法检.测小鼠血清TNF.-α、CCL20含量,RT-PCR法检测小鼠结肠TNF-αmRNA、CCL20 mRNA表达。结果1.造模时间历时7个星期共49天,在第4周以及第5周围炎症高发期,小鼠在实验周期内出现体重下降、毛发脱落、稀便及便血,取材后观察肠道组织有炎细胞浸润及癌变。2.与空白组相比,模型组小鼠疾病活动指数、体重变化、结肠.长度(P<0.01),差异极显著;与模型组.相比,阳性组、痛泻要方.高剂量组、痛泻要方中.剂量组、痛泻要方低剂量组体重、疾病活动指数(P<0.05),差异显著;痛泻要方高剂量组、痛泻要方.中剂量组、痛泻.要方低剂量组相.对比,痛泻要方中.剂量组效果最接近阳性组;药物干预后,空白组小鼠结肠..组织中SMAD4表.达高于其他组(P<0.01),与模型组.相比,阳性.组SMAD4表达较高(P<0.01),痛泻要方中剂量组SMAD4表达(P<0.05)。痛泻要方能.够升高结肠中SMAD4的表达。与空白组比,模型组小鼠TGF-β1表达(P<0.01)差异极显著;与模型组比,阳性组TGF-β1表达(P<0.05),痛泻要方中剂量组TGF-β14表达(P<0.05);与空白组比,模型组小鼠血清TNF-α、CCL20含量(P<0.01)差异极显著;与模型组比,阳性组小鼠血清TNF-α、CCL20含量(P<0.05),痛泻要方中剂量组小鼠血清TNF-α、CCL20含量(P<0.05);与空白组比,模型组小鼠结肠TNF-αmRNA、CCL20mRNA表达(P<0.01)差异极显著;与模型组比,阳性组小鼠TNF-αmRNA、CCL20 mRNA表达(P<0.05),痛泻要方中剂量组小鼠TNF-αmRNA、CCL20mRNA表达(P<0.05)。痛泻要方能够降低结肠血清及组织中TNF-α、CCL20的表达,对抑制结肠炎到结肠癌的进展有一定干预作用。结论1.痛泻要方对结肠炎相关结肠癌演进过程具有良性干预作用2.痛泻要方能增加结肠黏膜TGF-β1、SMAD4含量,发挥抑制炎症发展作用3.痛泻要方干预结肠炎相关结直肠癌的机制可能与上调TGF-β1、SMAD4抑制TNF-α、CCL20表达有关。