扇贝多肽对紫外线损伤小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用及其机制研究

扇贝多肽(PCF)是从海洋生物栉孔扇贝(Chlamys farreri)中得到的水溶性多肽。本文首先通过复制小鼠的地塞米松免疫抑制模型,采用免疫组织化学、MTT法和流式细胞仪的方法,探讨扇贝多肽在体内对胸腺细胞和外周血淋巴细胞增殖和分化的作用。在此基础上,通过正交设计实验方案,筛选出适宜的紫外线辐照参数,建立了紫外线对体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的病理模型。实验设计分组为:对照组,紫外线照射模型组,紫外线+0.125%PCF组,紫外线+0.25%PCF组,紫外线+0.5%PCF组和紫外线+0.1%VitC组。通过采用MTT法检测淋巴细胞活性;透射电镜观察细胞超微结构的改变;琼脂糖凝胶电泳观察DNA条带特征性变化;酶生化法测定细胞胞浆内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量以及细胞抗超氧阴离子能力(A-SAC)和总抗氧化能力(T-AOC);流式细胞仪测定细胞凋亡率;Fluo-3-AM荧光染色测定细胞内游离[Ca2+]I的变化;Rhodamine 123荧光染色测定线粒体膜电位(ΔψМ)的改变;免疫细胞化学检测细胞p53、Bcl-2、Bax基因蛋白的表达;PT-PCR检测c-fos mRNA和c-jun mRNA的表达;原位杂交检测细胞P21WAF1 mRNA、P38 mRNA的基因表达;琼脂糖凝胶电泳观察各组不加入或分别加入ERK抑制剂、JNK抑制剂和P38抑制剂后的DNA ladder的变化;western-blot检测磷酸化ERK、磷酸化JNK、和磷酸化P38的活性等方法,探讨在紫外线照射下,扇贝多肽(PCF)对小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的保护作用及机制。 实验结果表明,PCF腹腔注射能够明显增强小鼠胸腺淋巴细胞转化能力,并促进DEX处理小鼠外周成熟的淋巴细胞增殖;在紫外线强度为6.16mJ/cm2,照射时间为10秒的照射条件下,建立了紫外线对体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的病理模型;0.125-0.5%浓度范围内的PCF能显著提高小鼠胸腺淋巴细胞的活性,降低淋巴细胞凋亡率,显著提高细胞浆中SOD、GSH-px的活性,降低ROS、