SOX5、SOX6在类风湿关节炎中的表达及雷公藤红素对胶原诱导关节炎鼠中SOX5、SOX6/RANKL通路的影响

实验目的： 本文探讨新转录因子SOX5、SOX6在类风湿关节炎中的表达情况及雷公藤红素对胶原诱导关节炎模型SOX5、SOX6-RANKL通路及骨侵蚀的影响。 实验方法： 1SOX5、SOX6在类风湿关节炎表达情况： 提取RA患者（n=40）PBMC的mRNA，以REAL TIME-PCR的方法检测SOX家族相关基因的表达。收集RA、OA及健康人的血清及关节液，以ELISA的方法检测SOX5及SOX6的表达。收集RA、OA及健康人的膝关节滑膜组织，以免疫组化的方法分析SOX5和SOX6的表达情况。 2雷公藤红素对PBMC和滑膜成纤维细胞中SOX5、SOX6、RANKL表达的影响 健康志愿者PBMC和类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系MH7A分别以促炎因子TNF-α和IL-1β刺激，REAL TIME-PCR观察不同浓度雷公藤红素（Celastrol,Cel）对促炎因子诱导的SOX5、SOX6、RANKL表达影响。 3雷公藤红素对CIA胶原诱导关节炎小鼠骨侵蚀和SOX5、SOX6及RANKL表达的影响 建立胶原诱导关节炎（CIA）小鼠模型，观察Cel对CIA小鼠模型的治疗作用并探讨其对类风湿关节炎骨侵蚀的影响及机制。内容主要包括：1.通过小鼠关节炎评分及关节病理切片观察CIA对小鼠关节局部炎症及骨侵蚀情况；2.通过免疫组织化学观察Cel对小鼠关节局部SOX5及SOX6表达的影响；3.通过REALTIME-PCR观察Cel对小鼠关节RANKL、SOX5、SOX6、IL-1β、IL-6、TNF-α及IL-8的表达。 实验结果： 1SOX5、SOX6在类风湿关节炎表达情况： SOX家族基因中的SOX5和SOX6在RA患者PBMC mRNA中表达最高；RA患者血清及关节液中的SOX5、SOX6均高于OA及健康对照组；RA及OA患者的关节滑膜中，SOX5及SOX6均较健康对照表达增高；其在滑膜巨噬细胞、滑膜成纤维细胞和破骨细胞中均有表达。 2雷公藤红素对PBMC和滑膜成纤维细胞中SOX5、SOX6、RANKL表达的影响: TNF-α和IL-1β刺激PBMC和滑膜成纤维细胞后，SOX5、SOX6和RANKL表达明显增强，Cel呈剂量依赖性抑制PBMC和MH7A中促炎因子诱导的RANKL、SOX5、SOX6表达，显著上调OPG/RANKL轴比值。 3体内实验： 与CIA组相比，Cel治疗组Cel可以显著抑制胶原诱导关节炎小鼠关节炎症（p<0.01）；关节组织病理学评分结果表明，与CIA组相比，Cel组关节组织病理学评分显著降低（p<0.001）；小鼠关节免疫组化结果表明，与对照组相比，CIA组关节中SOX5及SOX6表达明显增强，Cel能显著抑制CIA小鼠的SOX5及SOX6表达；REAL TIME-PCR实验结果表明，与CIA组相比，Cel组的RANKL、SOX5、 SOX6mRNA的表达下降（p<0.05）， OPG mRNA的表达上升，OPG/RANKL轴比值显著上调。 实验结论： 1.转录因子SOX5及SOX6在RA中高表达，可能参与RA病理过程。 2. Cel可以抑制PBMC和RA滑膜成纤维细胞系中促炎因子诱导的SOX5、SOX6和RANKL的表达。 3. Cel通过抑制SOX5/6-RANKL通路和破骨细胞活化，可能是其抗炎与阻止骨侵蚀的分子机制。