补肾化痰法影响骨髓间充质干细胞成脂和成骨分化的实验研究

目的: 从形态学、标志物蛋白合成(LPL、ALP、OCN)的角度,分别观察补肾法、化痰法、补肾化痰法对BMSCs成脂分化和成骨分化的影响,探讨补肾化痰法治疗骨质疏松症的可能作用机制。 方法: 1.运用全骨髓贴壁法分离培养纯化Wsitar大鼠BMSCs, 2.从细胞形态学、流式细胞仪检测细胞表面抗原等角度进行鉴定BMSCs。 3.使用1μmol/L地塞米松、0.5mmol/L IBMX、0.2mmol/L吲哚美辛、10μg/mL胰岛素联合诱导BMSCs成脂分化,通过细胞形态学观察、油红O染色及定量和用RT-PCR检测脂蛋白脂酶(LPL)mRNA表达,探讨补肾中药、化痰中药和补肾化痰中药分别对BMSCs成脂分化的影响。 4.使用0.1μmol/L地塞米松,10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠,50μg/mL Vitamin C联合诱导BMSCs成骨分化,通过检测茜素红染色及定量、碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OCN)mRNA表达,探讨补肾中药、化痰中药和补肾化痰中药对BMSCs成骨分化的影响。 结果: 1.采用全骨髓贴壁法可稳定获得均质性良好的大鼠BMSCs。 2.流式细胞仪检测大鼠BMSCs表面标志抗原CD29、CD44表达阳性,CD45表达阴性。 3.化痰中药能使BMSCs诱导形成的脂肪细胞减少,并下调成脂相关基因LPL-mRNA表达。 4.补肾化痰中药能促进BMSCs成骨诱导后细胞体外钙化,提高细胞内ALP活性,上调OCN-mRNA表达。 结论: 补肾化痰法治疗骨质疏松症的可能作用机制是:化痰法抑制BMSCs向脂肪细胞分化,补肾化痰法促进BMSCs向成骨细胞分化。