水皂角活性多酚提取、纯化与检测技术的研究

植物多酚具有抗氧化、抗自由基、抗紫外线等活性，广泛应用于医药、食品、化妆品等行业。水皂角又名山茶叶、山扁豆，民间应用历史悠久，主要用于清肝明目、和脾利水，散瘀化积，治疗湿热黄疸、暑热吐泻、水肿、目花、夜盲、偏头痛、劳伤积瘀、小儿疳积、脚气等疾病。现代药理以及植物化学研究证明，水皂角多酚是新发现的植物多酚类化合物，它除了具有其它植物多酚的共同特性之外，尤表现出强的脂肪酶抑制作用，能有效防止和治疗肥胖，极具开发潜力。目前，水皂角多酚的研究主要集中在药理方面，而对其提取、分离纯化与检测方面的研究国内外尚未见报道，本研究在这些方面作了初步探索，首次建立了一套经济、安全、适用于工业化生产的水皂角多酚提取、分离与检测方法。 本研究采用紫外可见分光光度法建立了水皂角总多酚的测定方法，该法具有操作简单，设备要求低，检测速度快，重现性好，灵敏度高，是目前适用于水皂角多酚工业化生产要求的最可行的检测手段。通过对检测波长的选择、标准品的选择、预处理方法、浓度与吸光度相关性的研究，确定了最佳检测波长为λ=760nm，以表儿茶素为标准品，在0.0004～0.0032mg/ml范围内，其浓度与吸光度呈良好的线性关系，回归方程为A=0.08949 C+0.01585，相关系数达r=0.9990，平均回收率分别为99.3％，99.5％，99.6％，RSD分别为1.01％，1.02％，1.01％（n=5）。稳定性、精密度和重现性均理想，其RSD分别为0.65％（n=6）、0.20％（n=5）、0.81％（n=5）。测定了不同生长期的水皂角总多酚含量，发现芽期的含量最高，其次是果期，考虑总多酚含量和生物产量，宜以果期为最佳采集期。 在提取工艺研究中，采用乙醇水溶液为浸提剂，具有安全、无毒、无有害溶剂残留等优点，符合健康食品以及医药品生产要求。以水皂角总多酚含量为考察指标，通过单因素实验、正交实验以及方差分析，综合考虑提取效果与生产成本，对提取条件进行了优化，确定了最佳提取工艺为A3B2C1D2，即乙醇浓度为70％，浸提温度为70℃，浸提时间为5h，固液比为1：10。 本研究采用大孔树脂对水皂角多酚进行富集分离，具有可操作性强、设备简单、质量稳定、经济效益好等特点。根据大孔树脂的吸附机理，本研究从大孔树脂本身的物理、化学特征和吸附介质性质入手，运用静态吸附与解吸实验对大孔树脂进行筛选。然后，通过单因素实验、正交实验以及方差分析确定了水皂角多酚分离纯化的最佳操作条件。静态吸附与解吸中，S-8大孔树脂表现出最好的吸附性能与良好的解吸效果，其饱和静态吸附量为63.23mg/ml，解吸率为97.62％。实验表明，料液浓度、上柱速度以及料液酸碱度明显影响吸附效果，而洗脱效果由乙醇浓度、洗脱速度、洗脱剂酸碱度以及洗脱剂用量来决定。实验确定的最佳吸附条件为A3B2C3，即上柱速度为2.5BV/h，料液浓度为4mg/mL，料液pH值为6.5，最佳洗脱条件为A2B3C2D1，即乙 醇浓度为75％，洗脱流速为ZBVth，洗脱液pH值为8，洗脱体积为3．SBV。工艺放 大实验验证了该分离富集方法的有效性，结果证明 S｛动态吸附量达 70mg／ml湿树脂 以上，洗脱率可达98％以上，分离纯化后的产品水皂角总多酚含量达65％，较原材料 中水皂角多酚含量提高30倍以上。 对水皂角纯化产品进行了谱学测定。首次建立了水皂角提取物的HPLC和HPTLC 分离方法，初步建立了水皂角纯化产品的指纹图谱。首次将紫外吸收光谱／它谱／七 谱和DEPT谱等波谱技术运用于水皂角纯化产品的定性分析，直接、快速检测到了水 皂角纯化产品中的有效组分。