氧化槐果碱通过抑制ERK1/2-COX-2-PGE2通路缓解角叉菜胶诱导的小鼠炎性疼痛

目的观察氧化槐果碱(Oxysophocarpine,OSC)对角叉菜胶诱导的炎症性疼痛的镇痛作用,并探讨氧化槐果碱对ERK1/2 COX-2 PGE2通路的影响。方法1、行为学实验方法①采用二甲苯致小鼠耳肿胀实验评价OSC的抗炎作用;②采用足趾容积测量仪和机械刺痛法分别测定角叉菜胶致小鼠炎性疼痛损伤足的足趾容积和机械缩足反射阈值。2、采用HE染色法对角叉菜胶致小鼠炎性疼痛损伤足组织进行染色,观察组织病理形态的改变,并统计中性粒细胞数目。3、采用Q-PCR法检测角叉菜胶致小鼠炎性疼痛损伤足组织中ERK1/2、COX-2的m RNA表达水平。4、采用免疫组织化学法测定OSC对角叉菜胶致小鼠炎性疼痛损伤足组织中p-ERK1/2,COX-2免疫阳性细胞表达的影响。5、采用Western blot方法检测OSC对角叉菜胶致小鼠炎性疼痛损伤足组织中ERK1/2、p-ERK1/2、COX-2蛋白含量的影响。6、采用ELISA法检测OSC对角叉菜胶致小鼠炎性疼痛损伤足组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和PGE2蛋白表达的影响。结果1、①在小鼠耳肿胀模型中,与模型组比较,OSC可降低二甲苯致小鼠耳肿胀的耳肿胀度(P<0.01);②在角叉菜胶致炎性痛模型中,与模型组比较,OSC可抑制小鼠损伤足足肿胀的程度(P<0.01)并提高小鼠损伤足的机械缩足反射阈值(P<0.01)。2、HE染色结果显示,与模型组比较,OSC可抑制损伤足组织的水肿并减少损伤组织中中性粒细胞的数量(P<0.05)。3、Q-PCR结果显示,与模型组比较,OSC不影响损伤足组织中ERK1/2 m-RNA的表达(P>0.05),但显著降低了COX-2的m-RNA表达水平(P<0.05)。4、免疫组化结果显示,与模型组比较,OSC显著降低了损伤足组织中p-ERK1/2、COX-2的平均积分光密度(P<0.05),且表达集中在细胞核区域。5、Western blot结果显示,与模型组比较,OSC可使炎性痛小鼠损伤足组织中p-ERK1/2、COX-2的蛋白表达量降低(P<0.01),但对ERK1/2的蛋白表达无明显影响(P>0.05)。6、ELISA结果显示,与模型组比较,OSC显著降低了炎性痛小鼠损伤足组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2蛋白的表达(P<0.01)。结论OSC对角叉菜胶诱导的炎性疼痛具有明显的镇痛作用,其镇痛机制可能与OSC调节ERK1/2 COX-2 PGE2信号通路有关。