姬菇原生质体技术的研究

本论文对影响姬菇原生质体制备、再生的条件进行了研究。结果表明：以液体静置MYG培养基培养3天的菌丝体，以2％的溶壁酶作为酶解液，在30℃下，0.6m/moL硫酸镁作为渗透压稳定剂，酶解3h为制备姬菇原生质体的最佳条件，以菌龄为1d，酶解时间为1h，0.6mol／L蔗糖作为渗透压稳定剂的PDA再生培养基为姬菇原生质体再生的最佳条件，再生率达4.5％。 对影响姬菇5号与署优1号原生质体PEG融合的条件进行了研究。结果表明：以PEG6000的浓度应为35％，Ca2+浓度应为0.010mol／L，融合时温度应在30℃，PEG处理时间为20min，PH为8.0为姬菇5号与署优1号原生质体PEG融合的最佳条件，融合率达3.3×10-4。 对影响姬菇5号与署优1号原生质体电融合的条件进行了研究。结果表明：交流电场频率为1500KHz，交流电场强为300V／cm，直流脉冲场强为2.5KV／cm的，脉冲宽幅为60μs时，脉冲次数为4～5次，电融合液甘露醇浓度10％，CaCl2浓度0.4mmol／L浓度为姬菇5号与署优1号原生质体电融合的最佳条件，融合率达21％。