新疆及内蒙古部分地区汉坦病毒的分子流行病学调查

目的:在蒙新干草原和荒漠地区,汉坦病毒一直都是只在局部发现疫源地。但是近年来,随着分子生物学技术应用到监测中,国内外新的汉坦病毒型别的不断发现。而蒙新地区相对于汉坦病毒的进化条件,具有相对独特的地理特点,尤其内蒙古自治区近年来疫区范围不断扩大,已从东部蔓延到西部的巴彦淖尔市,严重威胁着广大人民群众的生命和健康,是目前内蒙古危害较大的病毒性自然疫源性疾病。为了查清这两个地区汉坦病毒的流行情况,我们进行了本次实验。 方法:2005年春末我们在巴彦淖尔市临河区采集了肾综合征出血热患者恢复期血清及部分亲密接触者的血清,并在肾综合征出血热病人的居民区及野外采用夹夜法捕鼠。在实验室,我们使用间接免疫荧光法对血清检测抗体。对经冰冻切片的鼠肺标本先使用间接免疫荧光进行抗原检测,之后对抗原呈阳性及可疑阳性进行总RNA的提取,应用逆转录―巢式聚合酶链式反应检测汉坦病毒核蛋白核苷酸,同时扩增部分糖蛋白核苷酸序列和核蛋白核苷酸全序列。另外对呼和浩特市部分阳性标本我们也进行了核蛋白核苷酸全序列的扩增。核蛋白核苷酸全序列的获得需要进行克隆。测序获得序列后,用DNAStar和Phylip等软件进行系统发生分析。 2005年夏我们在新疆石河子150团莫索湾地区采用夹夜法捕鼠。在实验室,我们使用间接免疫荧光法对经冰冻切片的鼠肺标本先使用间接免疫荧光进行抗原检测,应用DNAStar和Phylip等软件对鼠细胞色素B进行系统发生分析,并依据宿主动物的生境与共进化关系分析该地区的检测结果。 结果:1.我们在内蒙古巴彦淖尔地区居民区共获得140只鼠。其中褐家鼠119只,小家鼠21只,褐家鼠为该区的优势鼠种。获得的126份鼠血条抗体阳性率为19.1%,有很高的感染率和带病毒率。在野外共捕获193只鼠,子午沙鼠为野外优势鼠种。2.对获得的9份病人血清和2份正常人血清进行检测,发现血清IgG均显示对SEO型L99株抗原的反应滴度高于HTN型76-118株。3用逆转录―巢式聚合酶链式反应检测抗原呈阳性的褐家鼠鼠肺,共获得9个部分核蛋白核苷酸序列和9个部分糖蛋白核苷酸序列,对其核苷酸序列进行系统发生分析,均为SEOⅠ亚型。4共成功获得3个核蛋白核苷酸全序列,分别是巴彦淖尔市临河的NMLRn86,呼和浩特市的NMHRn55和NMTRn56。5我们在石河子地区共捕获捕鼠235只,其中子午沙鼠为该区优势鼠种,占79.57%。鼠肺标本先使用间接免疫荧光法和直接免疫荧光检测进行抗原检测,结果无阳性反应。对于新疆地区的分析结果仍需进一步分析试验。 结论:综合该区人文、地理方面的特征对该区疫源地结构、疫区类型、流行特征、流行因素、传播机理、人与动物感染与流行规律等方面进行分析,汉城病毒为巴彦淖尔地区流行性出血热暴发的主要病原体。同时综合新疆地区宿主动物生境与进化特征分析了新疆石河子地区的汉坦病毒调查结果。