延胡索（Corydalis yanhusuo W.T. Wang）的化学成分和生物活性研究

延胡索为罂粟科紫堇属植物延胡索(Corydalis yanhusuo W. T. Wang)的干燥块茎,是著名的浙八味之一,能活血散瘀、行气止痛,不仅具有镇痛、镇静和催眠作用,对冠心病、心律失常、胃溃疡等多种疾病都具有较好的临床治疗效果。 本文综合运用硅胶柱色谱、制备型薄层色谱、制备型高效液相色谱等多种现代色谱学分离手段,对延胡索(Corydalis yanhusuo W. T. Wang)干燥块茎60%乙醇提取物氯仿萃取部分进行了系统的化学成分研究,从中分离得到生物碱20个。根据理化性质和波谱数据(UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR和2D-NMR)鉴定了它们的结构,包括15个原小檗碱型生物碱,分别为：l-四氢黄连碱(l-tetrahydrocoptisine)(1)，d-紫堇碱(d-corydaline)(2),四氢小檗碱(tetrahydroberberine)(3),元胡宁(yuanhunine)(4),l-四氢巴马亭(l-tetrahydropalmatine)(5),l-四氢非洲防己胺(l-tetrahydrocolumbamine)(6),去氢紫堇碱(dehydrocorydaline)(7),去氢元胡宁(dehydroyuanhunine)(8),13-甲基巴马士宾(13-methylpalmatrubine)(9),去氢紫堇球碱(dehydrocorybulbine)(10),巴马亭(palmatine)(11),小檗碱(berberine)(12),8-氧黄连碱(8-oxocoptisine)(13),N-甲基氢化小檗碱(N-methylcanadine)(14),N-甲基四氢巴马亭(N-methyltetrahydropalmatine)(15)；5个阿朴菲型生物碱,分别为：去二氢海罂粟碱(didehydroglaucine)(16),7-醛基脱氢海罂粟碱(7-formyldehydroglaucine)(17),海罂粟碱(glaucine)(18),(+)-O-甲基球紫堇碱(O-methylbulbocapnine) (19)南天竹宁碱(nantenine)(20)。其中,化合物8为新化合物,化合物9和17为新天然产物,化合物19为首次从罂粟科植物中分离得到,化合物14为首次从该属植物中分离得到,化合物13和15为首次从该种植物中分离得到。 在此基础上,采用HPLC-DAD技术,对延胡索HPLC指纹图谱进行了初探。初步建立了延胡索总提取物和氯仿萃取部分的指纹图谱,并分别对其中的12个主要色谱峰从化学上进行了准确的指认,指认峰面积总和分别达到总峰面积的73.0%和86.0%。 采用MTT法或者SRB法对分离得到的16个单体化合物进行了体外细胞毒活性的考察。结果表明,化合物7、9和12对MCF-7显示较明显的活性,并具有一定的量效关系；化合物7、12、18和20对K562显示较明显的呈剂量依赖的抑制作用；其中化合物7、9和18对正常细胞LO2增殖具有相似的抑制作用；而化合物12可能对K562和MCF-7增殖具有选择性抑制作用；化合物20可能对K562增殖具有选择性抑制作用。 采用刀豆蛋白A作为阳性对照,考察了延胡索中分离得到的16个单体化合物对脾T淋巴细胞增殖速率的影响。结果初步显示,化合物1和15呈现与剂量相关的促淋巴细胞增殖效应。 对延胡索中的16个单体化合物促内皮细胞分泌NO的活性进行了测试。结果表明,化合物1、5、12和16显示明显的促NO分泌作用。提示上述物质可能与延胡索生物碱提高冠脉流量的作用有关。 同时,还考察了延胡索中的单体化合物抗大鼠心肌细胞H9c2缺血缺氧的活性。结果表明,化合物1、2、5和12对心肌细胞H9c2缺血性损伤具有一定的保护作用,且保护效应与剂量正相关。