青钱柳、黑灵芝、独角莲中的活性物质对人源宫颈癌HeLa细胞的作用研究

宫颈癌是妇科三大恶性肿瘤之一，在我国的发病率较高。其治疗手段较为单一，且副作用较大，受到一定限制，因此筛选和研究更为有效的天然低毒治疗药物对宫颈癌的治疗具有重要意义。青钱柳、灵芝、独角莲作为我国名贵中药材，其有效成分对某些肿瘤的预防和治疗具有一定作用，但对宫颈癌是否有治疗作用鲜有文献报道。本文通过研究青钱柳多糖(polysaccharides isolated fromCyclocarya paliurus (Batal.) Iljinskjk, PCP)、黑灵芝子实体甾醇(sterol from fruitbody of Ganoderma atrum, SGA)、独角莲有机溶剂提取物(the solvent extracts ofTyphonieum giganteum Engler., STGE)对人源宫颈癌HeLa细胞的生长作用，探讨了其是否有抑制宫颈癌生长的作用及其可能机理，为青钱柳、灵芝和独角莲的抑癌作用，及其抑癌的活性成分的研究提供理论参考。 本研究通过采用倒置显微镜对PCP、SGA和不同提取方法得到的STGE作用了24 h、48 h的HeLa细胞进行形态学观察；用不同浓度的PCP、SGA和不同提取方法得到的STGE分别作用HeLa 24 h、48 h后，通过四噻唑蓝法(MTT法)，检测PCP、SGA和STGE对HeLa细胞生长的影响；Annexin法检测PCP、SGA和STGE A对HeLa细胞诱导凋亡的作用；流式细胞仪对PCP、SGA作用后的HeLa细胞进行细胞周期检测及RT-PCR法检测PCP、SGA作用后的HeLa细胞p16、p21、cyclinB1、bax、bcl-2基因表达变化，得出了以下结果： ①在倒置显微镜下观察发现，PCP组中的细胞形态变圆，生长稀疏，随着作用时间的延长，细胞体积增大；SGA组中的细胞贴壁率差，破碎细胞较多；不同提取方法得到的STGE各组中细胞形态呈圆形，体积变小，细胞核浓缩，多数细胞脱落而悬浮于培养基中，随着作用时间的延长，破碎细胞增多，STGE各组中STGE A对HeLa细胞形态的影响性较大。 ②浓度为50、100、200、400μg／mL的PCP，20、40μg／mL的SGA和100 mg／mL(生药浓度)不同提取方法得到的STGE均显著性抑制HeLa细胞的生长(P＜0.01)；SGA对HeLa细胞的抑制作用有时间和浓度依赖性。 ③Annexin法检测表明：PCP和SGA引起HeLa细胞发生凋亡的作用较弱，但随着SGA作用时间的延长，能微弱的增高细胞的凋亡率与死亡率；STGE A引起HeLa细胞发生凋亡的作用较强，并随着STGEA作用时间的延长，凋亡晚期细胞增多。 ④流式细胞术检测表明：PCP作用HeLa细胞24h能够显著阻滞细胞于S期，且随着作用时间的延长，细胞阻滞在S期的比例呈升高趋势：SGA能够阻滞细胞于S期，但作用不明显。 ⑤用RT-PCR法对PCP和SGA作用HeLa细胞基因的检测表明：各组所提取的总RNA均有β-actin、p16、p21、cyclinB1、bax、bcl-2的基因表达；各组HeLa细胞的β-actin表达基本稳定，可以作为内参基因；PCP和SGA作用后的HeLa细胞p21、bax的基因表达量增多，细胞bcl-2的基因表达量减少。 综上所述，PCP、SGA显著性抑制HeLa细胞的生长，使细胞在S期发生阻滞，同时可引起细胞p21、bax的基因表达量增多，细胞bcl-2的基因表达量减少；STGE通过引起HeLa细胞显著凋亡达到抑制细胞生长的作用。