裙带菜茎硫酸多糖抗病毒活性及其作用机理的初步研究

目的: 研究裙带菜茎硫酸多糖的抗病毒活性,并对其作用机理进行初步研究,为抗病毒作用机理的进一步研究奠定基础,并为新型的抗单纯疱疹病毒1型（herpes simplex virus type-1,HSV-1）药物的开发提供理论依据。 方法: 1.应用MTT法检测裙带菜茎硫酸多糖对细胞的毒性作用。 2.应用细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）法,MTT法和空斑减数实验（plaqueredction assay,PRA）检测裙带菜茎硫酸多糖的抗病毒活性。 3.应用CPE法和PRA法,采用四种不同的加药方式在细胞水平探讨裙带菜茎硫酸多糖抗HSV-1的作用机理。 4.应用逆转录-聚核酶链反应（Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）方法检测裙带菜茎硫酸多糖对HSV-1 gD糖蛋白基因US6和DNA聚合酶基因UL30的影响。 5.流式细胞仪分析裙带菜茎硫酸纯多糖对HSV-1感染导致的细胞周期紊乱的恢复情况。 6.CPE法初步检测裙带菜茎硫酸多糖对病毒突变株的选择情况。 结果: 1.裙带菜茎硫酸粗多糖（UPP1）和裙带菜茎硫酸纯多糖（UPP2）对Vero细胞的半数毒性浓度(50%toxic concentration,TC50)均远大于10000μg/ml,空斑减数实验测得其对HSV-1的半数抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC50)分别为8.04μg/ml,13.54μg/ml,治疗指数（therapeutic index,TI）则分别大于1244,739。 2.UPP1、UPP2对柯萨奇B3病毒（coxackie virus group B3,CVB3）、单纯疱疹病毒2型（herpes simplex virus type-2,HSV-2）所致的细胞病变都有明显的抑制作用,但是二者对伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）所致的细胞病变均无明显的抑制作用。 3.四种不同加药方式判定裙带菜茎硫酸多糖抗病毒的作用阶段。结果显示UPP1无直接灭活病毒的作用,但是可干扰HSV-1对宿主细胞的吸附;而UPP2对HSV-1有一定的直接灭活作用,但对病毒的吸附没有影响;二者均不影响病毒的释放,但二者在高剂量对病毒DNA的复制均有一定的抑制作用。 4.与病毒对照组相比,UPP1能降低HSV-1 US6基因与UL30基因mRNA的表达水平,有显著性差异（p＜0.05）,UPP2能降低UL30基因的mRNA的表达水平（p＜0.05）,但对HSV-1US6基因的表达没有影响（p＞0.05）。 5.UPP2能部分恢复HSV-1感染导致的细胞周期的改变。 6.HSV-1在裙带菜茎硫酸纯多糖存在的情况下,连续扩增12代,未发现病毒突变株的出现。 结论: 本研究证实了裙带菜茎硫酸多糖具有抗HSV-1作用,其抗HSV-1作用机制有以下可能:（1）UPP1抑制病毒与细胞的吸附,抑制感染细胞中HSV-1 gD基因和DNA聚合酶基因的转录;（2）UPP2对病毒有直接灭活作用,抑制DNA聚合酶基因的转录;（3）UPP2能部分恢复病毒感染导致的紊乱的细胞周期。