大黄素对CBRH-7919细胞凋亡及凋亡诱导因子、核酸内切酶G mRNA表达的影响

目的:根据国内外近年对凋亡途径的研究成果,进一步研究大黄素（emodin,EM）对大鼠肝癌细胞CBRH-7919细胞凋亡及凋亡诱导因子（apoptosis inducing factor,AIF）和核酸内切酶G（endonuclease G,EndoG）mRNA表达的影响,探讨大黄素的抗癌机制。 方法:（1）体外细胞培养:常规培养大鼠肝癌细胞CBRH-7919;（2）应用MTT法检测不同浓度大黄素对大鼠肝癌细胞系CBRH-7919增殖抑制作用,并计算其不同时间点的IC50值,根据MTT干预结果选择干预条件;（3）实验分空白对照组、Caspase抑制剂Z-VAD-FMK干预组、大黄素组、大黄素+Z-VAD-FMK组四组;（4）应用原位末端标记法（TUNEL）检测各组细胞凋亡情况。（5）采用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,QT-PCR）法检测各组AIF、EndoG mRNA的表达情况。 结果:MTT法检测显示大黄素能抑制大鼠CBRH-7919细胞的增殖,其48h时IC50值为44.8μmol/L,且呈剂量依赖效应关系和时间依赖效应关系。用大黄素(48h IC50浓度)、大黄素联合Caspase抑制剂处理CBRH-7919细胞后光镜下可见明显的凋亡细胞;TUNEL法检测示凋亡细胞数随处理时间延长而增多。实时荧光定量PCR检测示大黄素及大黄素+Z-VAD-FMK组细胞AIF、EndoG mRNA表达上调,与空白组比,差异有显著性（P＜0.01）。 结论:大黄素对大鼠肝癌CBRH-7919细胞的增殖抑制作用呈剂量与时间依赖性;大黄素能上调AIF、EndoG mRNA表达,诱导非Caspase依赖的细胞凋亡。