钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪抗脑缺血作用与机制研究

脑缺血是危害人类健康的主要疾病之一，它导致脑功能及脑结构发生不可逆的变化，也是临床上常见的预后较差的一种疾病。如何防治脑缺血损伤引起了基础与临床研究的广泛重视。针对脑缺血损伤的某些环节，寻找切实有效的脑卒中防治药物已成为当今医学领域的重大课题。本文利用离体缺氧模型，研究了钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪的抗缺血机制与作用。 本文应用原代培养海马细胞的缺氧缺糖剥夺模型，通过使用激光扫描共聚焦显微技术和荧光标记技术，对缺氧过程中神经细胞的NO和钙离子变化进行了实时动态的检测。结果表明缺氧过程中，细胞内NO的合成和钙离子浓度有显著升高，NO和钙离子荧光的升高值分别为62％和174％；这种升高在去除细胞外液的钙离子后受到明显抑制，表明缺氧时胞内钙离子的增加主要来源于胞外的钙离子。 在培养海马细胞的缺氧缺糖剥夺模型中，钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪（trifluoperazine，TFP）对缺氧导致的钙离子升高有明显的抑制作用，10μM和50μMTFP能够使缺氧诱导的细胞内Ca2+的荧光升高降低56.4％和72.6％；TFP还能剂量依赖性抑制缺氧诱导的NO合成，50μMTFP能够明显抑制缺氧时细胞内NO合成的增加（P＜0.01）。由于通过NMDA受体内流的Ca2+被认为在脑损伤中起重要作用，我们研究TFP对Glu诱发的Ca2+升高的影响。结果表明TFP能够显著地抑制谷氨酸诱导的胞内Ca2+的升高。这一结果也显示TFP可能通过作用NMDA受体来抑制缺氧时的钙离子升高。 采用海马脑片离体缺氧模型，我们观察了缺氧导致的兴奋性神经递质天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）与抑制性神经递质牛磺酸（Tau）、Y-氨基丁酸（GABA）的含量变化以及TFP对这些氨基酸变化的影响。实验表明：缺氧能促进海马组织各氨基酸的释放，而TFP可以显著降低由缺氧引起的兴奋性氨基酸的释放。 为了探讨TFP在缺氧损伤中对神经细胞的保护作用，我们采用神经电生理技术，从电生理角度研究了TFP在海马组织缺氧灌流中的保护作用。结果发现TFP可以降低缺氧损伤电位（HIP）的出现率，提高复氧后脑片群峰电位（PS）的恢复率和恢复程度；我们还应用WST—1法，研究了TFP对培养海马神经细 廊江大学尊士学哎讼文 胞缺氧缺糖后活性的影响，发现用TFP作用后，细胞液的OD值比缺氧缺糖组有 显著升高（P＜0．05）。以上结果表明 TFP在缺氧损伤中对神经细胞有明显的保护 作用。 本论文研究了钙调蛋白抑制剂的抗缺血机制与作用，结果表明TFP对缺血 过程中兴奋性氨基酸释放、细胞内Ca卜升高和NO合成有明显的抑制作用：TFP 可能通过这些途径减轻缺氧对神经细胞的损伤，起到保护神经细胞的作用。本研 究为脑缺血的病理研究与临床治疗提供了新的思路，为抗脑缺血药物的开发提供 了新的筛选平台。