厚朴叶和厚朴籽化学成分分析及生物活性研究

厚朴（Magnolia officinalis Rehd.et Wils.）是我国的传统中药,为木兰科木兰属植物,始载于《神农本草经》,其后历代本草均有记载,其主要用药部位是厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮,其性温、味苦、辛,具有燥湿消痰,下气除螨等功效。厚朴为落叶乔木,生长周期长,一般要生长15年以上才能剥皮以供药用。而采伐后的厚朴树遗留下大量的厚朴叶和厚朴籽,未到采收树龄的厚朴每年也要产生大量的厚朴叶和厚朴籽,厚朴叶和厚朴籽不是药用部位,因此这些丰富的资源目前均未加以利用,造成厚朴叶、厚朴籽资源的极大浪费。通过分析不同采收月份厚朴叶的营养成分、化学成分含量以及厚朴叶提取物的抗氧化、抗菌、抗腹泻等作用,为厚朴叶粉或厚朴叶提取物作为饲料添加剂、食品添加剂、天然抗氧化剂、植物源杀菌剂或提取抑菌物质原料等多种利用途径提供依据,也为厚朴叶更深入的研究奠定基础;通过分析厚朴籽油的化学成分和生物活性,为厚朴籽的深入研究以及开发利用奠定基础。1、采集4～9月厚朴叶,干燥粉碎后,取其粉末,通过一系列含量测定方法,测定不同采收月份厚朴叶的水分、粗纤维、粗脂肪、维生素C、蛋白质、氨基酸、矿质元素含量,结果表明厚朴叶水分含量范围为41.63%82.51%,粗纤维为20.52%24.10%,粗脂肪为3.87%5.94%,维生素C为22.84～91.01μg/g,还原糖为7.54%13.99%,可溶性糖为2.21%6.19%,蛋白质为0.19%6.40%。分析发现厚朴叶含有Ca、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn等矿质元素,共检测出17种氨基酸。所有营养成分指标在不同采收月份间大多具有显著性差异。与其它月份比较而言,9月份生长的厚朴叶各项营养成分指标相对较好,为最佳采收月份。因此可以将9月份采收的厚朴叶经过加工,作为饲料添加剂,将厚朴叶资源加以利用。2、取干燥粉碎后4～9月的厚朴叶,采用国标方法测定不同采收月份厚朴叶中总黄酮、厚朴酚与和厚朴酚的含量,结果表明厚朴叶中总黄酮含量为0.83%1.78%,厚朴酚含量为0.25 mg/g0.54 mg/g,和厚朴酚的含量为0.25 mg/g0.67 mg/g。厚朴叶中总黄酮含量和酚类含量均低于厚朴皮中的含量,但是厚朴叶资源丰富,每年大约有76万吨的蕴藏量,是厚朴皮的5倍,因此厚朴叶可以作为天然抗氧化剂的原料,从中提取总黄酮和酚类物质,应用于食品行业中。除此之外厚朴酚与和厚朴酚是很好的抑菌剂,作为食品添加剂还具有一定的防腐作用。3、按照提取溶剂的极性大小,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、乙醇、甲醇和水对9月份厚朴叶粉末进行回流提取,料液比为1:10（g/mL）,提取时间为2 h,过滤提取液并将滤液减压浓缩至浸膏。最后取适量7种提取物浸膏配制成一定浓度,测定7种提取物对DPPH、ABTS自由基的清除能力和对FRAP的还原能力。结果表明,7种提取物都具有一定的抗氧化能力,且不同提取物之间具有一定的差异。在三种抗氧化能力指标中,正丁醇提取物和乙醇提取物的抗氧化能力优于其他5种提取物。因此厚朴叶正丁醇提取物和乙醇提取物中含有抗氧化活性物质多于其他5种溶剂提取物,如将厚朴叶作为天然抗氧化剂的原料,可以选择正丁醇和乙醇为提取溶剂。4、分别用乙酸乙酯、70%乙醇、无水乙醇、丙酮振荡提取厚朴叶中的有效成分,得到各溶剂提取物浸膏,并配置成1 g（叶粉）/mL的样品溶液,采用二倍稀释法测定不同溶剂提取物的抑菌活性。结果发现不同溶剂厚朴叶提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有一定的抑制作用,其抑菌活性与提取物中的酚类化合物以及脂肪酸等抑菌活性物质有关。厚朴叶提取物具有抑菌活性,也为其能作为饲料添加剂提供了理论基础和依据,也为厚朴叶在其他方面的应用开发奠定了基础。5、制备厚朴叶水提物和95%乙醇提取物,实验中随机将小鼠分为正常组、阴性对照组、厚朴叶水提物低、中、高剂量组、厚朴叶醇提物低、中、高剂量组、阳性对照组。通过蓖麻油造腹泻模型,并给9组实验组小鼠进行灌胃处理,观察6小时内小鼠腹泻情况。结果实验表明厚朴叶水提物和醇提物对蓖麻油所致的小鼠腹泻有明显的拮抗作用,表现在厚朴叶水提物低、高剂量组和醇提物低、中、高剂量组的稀便级显著低于阴性对照组,水提物的低、高剂量组和醇提物的低、中、高剂量组的腹泻指数与阴性对照组具有显著性差异,因此厚朴叶提取物对于蓖麻油诱导腹泻的小鼠有一定的治疗作用,并能减轻小鼠腹泻症状。其中醇提物的治疗效果较水提取物治疗效果佳,低剂量组比中、高剂量组佳。6)通过GC-MS对厚朴籽油进行分离测定,得到了23个化学成分,其中厚朴籽油主要成分有去氢马烯雌酮（28.64%）、十八炔酸（28.59%）、3-羟基-6-甲基-2-对甲苯基-苯并吡喃-4-酮（17.51%）、9-十八烯酸-1,2,3-丙三乙酸酯（6.64%）、十六烷酸（4.51%）、2-[（4-叔丁基-苄基）-氨基]-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲腈（2.81%）、1-（1,1-二甲基乙基）-3,5-二甲基-2,4,6-三硝基苯（2.41%）、十六烷酸-2-羟基-1-（羟甲基）乙酯（1.01%）、去氢马烯雌酮甲醚（1.36%）、Z,E-2-甲基-3,13-十八碳二烯醇（2.34%）和维生素E（1.16%）。厚朴籽油中含多种化学成分,为厚朴籽油的开发利用提供了参考。7)通过测定厚朴籽油清除DPPH自由基和ABTS自由基的能力,发现厚朴籽油具有一定的抗氧化能力,并呈浓度依赖性增长。厚朴籽油对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均具有一定的抑菌能力,且对大肠杆菌和绿脓杆菌的抑菌能力优于对金黄色葡萄球菌的抑菌能力。厚朴籽油的抗氧化能力和抑菌能力可能与厚朴籽油中的脂肪酸成分有关。研究厚朴籽油的抗氧化、抑菌生物活性,为厚朴籽油的进一步研究奠定了基础。