金柑属（Fortunella Swingle）及其近缘属植物的ISSR及SSR分析

金柑属（Fortunella）植物为芸香科（Rutacease）柑橘亚科（Aurantioideae）柑橘族（Citreae）柑橘亚族（Citrinae）真正柑橘类植物，是我国著名的特产果树之一。同时，金柑果实亦广泛的用来做蜜饯，饮料，罐头，果汁，果酒等休闲食品，或提取香精油这种重要的工业原料。《本草纲目》中称该果味酸、甘、温、无毒，能下气、止渴、解酒、除臭。现代医学研究表明，它具有软化血管、治疗高血压、调节生理功能紊乱之功效。金柑果皮富含类柠檬苦素（Limonoids），具有抗肿瘤作用，能诱发和激活解毒酶谷胱甘肽转移酶（Glatathione-s-transferasc）的活性，能抑制化学致癌物质的致癌，是典型的第三代水果。 我国是金柑属植物的起源中心，也是目前世界上最大的金柑栽培种植中心，拥有金柑属植物的所有类型。但目前，关于金柑属植物的研究主要集中在栽培、管理、以及孢粉学、同工酶及细胞学等研究上，对现有的资源遗传多样性及种质鉴定工作还缺乏系统的研究，而金柑属植物和近缘属植物杂交可育，同时又具有无融合生殖的特性，以及在长期的人工栽培过程中，又产生了大量新的类型，这种状况不利于金柑属植物的种质资源的评价和保存。 针对目前金柑属植物研究上所存在的亲缘关系不明了的问题，本研究首次利用ISSR和SSR分子标记技术，对金柑属内各分类群之间的亲缘关系以及金柑属与近缘属植物之间的亲缘关系进行了探讨，为我国金柑属植物种质资源的鉴定、保存与利用提供理论基础。其主要结论如下： 1、以金柑属材料融安金弹（F．crassifolia Swingle）为试材，利用L16（4～5）正交设计表对ISSR-PCR和SSR-PCR反应体系中几个主要影响因子进行了优化筛选。结果表明在ISSR-PCR反应体系中，各组分最适浓度为：模板1.2ng.μL-1，引物0.16μmol.L-1，dNTPs0.15μmol.L-1，Taq酶0.05U.μL-1，Mg2+1.50μmol.L-1，1×PCR buffer，补充ddH2O至20μL。ISSR-PCR反应扩增程序为：94℃，4min：94℃，45s；52±3℃，1min；72℃，2min；40个循环；72℃，10min；4℃保存。在SSR-PCR反应体系中，各组分终浓度分别为：1×buffer，2.5mmol.L-1MgCl2，0.15μmol.L-1 dNTPs，上游引物和下游引物各0.2μmol.L-1，Taq DNA聚合酶0.075U.L-1，模板1ng.μL-1，补充ddH2O至20μl。SSR-PCR扩增程序为：94℃，3min；94℃，1min；53℃，1min；72℃ 1min，35个循环；72℃，10min；4℃保存。 2、利用优化的PCR反应体系，对所选取的材料进行了亲缘关系分析。从100条ISSR引物中筛选出16条引物，共扩增出157条带纹，其中多态性带纹有152条，NTSYS—PC2.02a软件聚类结论显示：在柑橘类植物中，金柑属（Fortunella）植物和柑橘属（Citrus）植物亲缘关系较近，和枳属（Poncirus）次之，这支持前人对柑橘类植物的划分。金柑属10个分类群可划