目的:研究丁氏溃结灌肠液对葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)大鼠的结肠组织中紧密连接蛋白(Occludin)、粘蛋白2(MUC2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血清免疫球蛋白A(IgA)的影响,探讨其可能的作用机制。方法:随机挑选10只大鼠,归入到空白对照组,其余的50只通过饮用DSS水溶液的方法建立大鼠UC模型。模型复制成功后,将参加造模的大鼠随机的分为5组,即模型组、丁氏溃结灌肠液低剂量组、丁氏溃结灌肠液中剂量组、丁氏溃结灌肠液高剂量组、美沙拉秦灌肠液组。除空白对照组外,其余各组给予生理盐水和相应药物连续灌肠14d。治疗14d后采用腹主动脉取血的方法,将全部大鼠处死,并剖取结肠标本。观察大鼠的体重、大便性状、便血情况及结肠组织的损伤变化并评分,评估疾病活动指数(Disease Activity Index,DAI),肉眼观察结肠组织大体情况并评分,光镜下观察结肠组织病理损伤并评分,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清IgA含量、蛋白质印迹(Western Blot)法检测结肠组织Occludin蛋白水平、实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测结肠组织MUC2mRNA、iNOS mRNA表达水平。结果:1、造模后大鼠精神萎靡、体重下降、大便溏稀伴有黏液脓血,DAI评分与空白对照组比较增高(P<0.05)。灌肠治疗后,丁氏溃结灌肠液组和美沙拉秦灌肠液组大鼠上述症状好转,DAI评分与模型组比较降低(P<0.05)。其中丁氏溃结灌肠液低剂量组情况不及其他用药祖,但也好于模型组。2、肉眼观察,模型组大鼠结肠粘膜出现不完整损伤,明显充血、水肿,并伴有溃疡形成,与空白对照组比较大体评分增高(P<0.05)。丁氏溃结灌肠液各组及美沙拉秦灌肠液组大鼠结肠粘膜损伤后得以修复,仅出现了充血、水肿、轻度糜烂,未见到明显的溃疡形成,与模型组比较大体评分下降(P<0.05)。3、光镜下观察,模型组大鼠结肠粘膜损伤后出现坏死脱落,伴发不同程度的溃疡灶,大量炎症性细胞浸润,粘膜腺体被破坏,排列稀疏紊乱,甚至缺如,并有程度不一的扩张,与空白对照组大鼠比较病理评分显著增加(P<0.01)。丁氏溃结灌肠液各组和美沙拉秦灌肠液组大鼠结肠粘膜未有明显的溃疡形成,粘膜水肿充血和炎症细胞浸润减少,与模型组比较病理评分明显的降低(P<0.01)。4、模型组大鼠血清IgA含量、结肠组织Occludin蛋白表达水平,与空白对照组相比显著下降(P<0.05),经丁氏溃结灌肠液及美沙拉秦灌肠液治疗后,各组血清IgA含量、结肠组织Occludin蛋白表达水平升高,与模型组比较有统计学差异(P<0.05)。5、模型组大鼠结肠组织iNOSmRNA的表达水平,与空白对照组比较明显的升高(P<0.01),经丁氏溃结灌肠液和美沙拉秦灌肠液治疗后,各组iNOSmRNA的表达呈下降趋势,与模型组比较有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠结肠组织MUC2 mRNA的表达水平,与空白对照组比较明显的减低(P<0.01),经丁氏溃结灌肠液和美沙拉秦灌肠液治疗后,MUC2mRNA的表达水平显示升高,与模型组比较有统计学差异(P<0.05)。在mRNA表达水平上的比较,丁氏溃结灌肠液中高剂量组与美沙拉秦灌肠液组之间无明显差异。结论:1、丁氏溃结灌肠液对DSS诱导的UC有一定治疗作用,可有效减轻其大便不成形、便血、体重下降等症状,使肠粘膜组织炎症好转,降低DAI评分和大体、病理评分。2、对于DSS诱导的UC肠道损伤,丁氏溃结灌肠液可显著升高Occludin蛋白、MUC2 mRNA表达水平,增高血清IgA含量,降低iNOSmRNA表达水平,从肠道机械屏障、免疫屏障及化学屏障方面,减轻大鼠肠粘膜炎症损伤。
