针刺和神经生长因子治疗脑性瘫痪的机理研究

针刺和神经生长因子治疗脑性瘫痪的机理研究 目的: 探讨针刺和神经生长因子(nerve growth factor,NGF)疗法对缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)幼鼠总体功能、凋亡及抗凋亡基因的表达和大脑组织病理形态学的影响,对针刺、NGF疗法治疗小儿脑性瘫痪(Cerebral palsy,CP)的机理进行探索,为临床新生儿CP及幼儿CP后遗症的治疗提供理论依据。 研究内容和方法: 1、8窝7d龄体重>12g新生SD幼鼠按区组随机分为①正常组②假手术组。余下幼鼠造模,建立HIBD幼鼠CP模型。成功模型按区组随机分为③模型组,④单纯针刺组,⑤针刺+NGF组。 2、按计划对实验幼鼠进行干预及检测体重、悬吊试验、斜坡试验和Y迷宫试验。 3、术后18天取材,用荧光定量PCR(SYBRGreen I染料法)检测其脑组织BCL-2、BAX、Casp3基因mRNA表达;用HE染色法观察其海马组织病理形态学改变;计数正常神经细胞数目;用TUNEL法检测其脑细胞凋亡情况。 结果: 1、脑组织大体:造模后存活的36只SD幼鼠中,33只出现翻身不能,平衡异常和左旋,造模成功。实验结束取材时可见:③模型组左侧脑组织出现大面积坏死,空泡;①正常组、②假手术组脑组织未见异常;④单纯针刺组、⑤针刺+NGF组左侧脑组织也出现了坏死和空泡,但都比③模型组轻,同时⑤针刺+NGF组比④单纯针刺组更轻。 2、体重变化:与③模型组相比,①正常组,②假手术组,④单纯针刺组,⑤针刺+NGF组幼鼠术后18天体重均数更高,体重增长趋势更强,差别有统计学意义。⑤针刺+NGF组与④单纯针刺组相比,差别无统计学意义。 3、悬吊试验:与③模型组相比,①正常组,②假手术组,④单纯针刺组,⑤针刺+NGF组幼鼠术后16天悬吊试验结果均数更高,肌力增强趋势更强,差别有统计学意义。⑤针刺+NGF组与④单纯针刺组相比,差别有统计学意义。 4、斜坡试验:与③模型组相比,①正常组,②假手术组,④单纯针刺组,⑤针刺+NGF组幼鼠术后16天斜坡试验结果均数更低,协调能力健全趋势更强,差别有统计学意义。⑤针刺+NGF组与④单纯针刺组相比,差别无统计学意义。 5、Y迷宫试验:与③模型组相比,①正常组,②假手术组,④单纯针刺组,⑤针刺+NGF组幼鼠术后18天Y迷宫试验结果均数更高,差别有统计学意义。⑤针刺+NGF组与④单纯针刺组相比,差别有统计学意义。 6、BCL-2基因mRNA表达:与③模型组相比,①正常组,②假手术组,④单纯针刺组,⑤针刺+NGF组幼鼠BCL-2基因mRNA表达A值均数更高,差别有统计学意义。⑤针刺+NGF组与④单纯针刺组相比,差别无统计学意义。 7、BAX基因mRNA表达:与③模型组相比,①正常组,②假手术组,⑤针刺+NGF组幼鼠BAX基因mRNA表达A值均数更低,差别有统计学意义。④单纯针刺组与③模型组相比,差别无统计学意义。 8、Casp3基因mRNA:与③模型组相比,①正常组,②假手术组,④单纯针刺组,⑤针刺+NGF组幼鼠Casp3基因mRNA表达A值均数更低,差别有统计学意义。⑤针刺+NGF组与④单纯针刺组相比,差别无统计学意义。 9、病理形态学改变:与③模型组相比,①正常组,②假手术组,④单纯针刺组,⑤针刺+NGF组幼鼠海马变性神经细胞数量显著减少,病理形态学明显改善。 10、海马正常神经细胞数目:与③模型组相比,①正常组,②假手术组,④单纯针刺组,⑤针刺+NGF组幼鼠海马正常神经细胞数均数更高,差别有统计学意义。⑤针刺+NGF组与④单纯针刺组相比,差别无统计学意义。 11、脑皮质组织细胞凋亡:与③模型组相比,①正常组,②假手术组,④单纯针刺组,⑤针刺+NGF组幼鼠脑皮质组织细胞凋亡指数均数更低,差别有统计学意义。⑤针刺+NGF组与④单纯针刺组相比,差别有统计学意义。 结论: 1.针刺对缺血缺氧脑性瘫痪模型幼鼠的体重增加,肌力增长,协调能力的恢复和学习记忆能力(智力)的恢复有明显作用。 2.针刺对缺血缺氧脑性瘫痪模型幼鼠脑组织的细胞凋亡基因BAX和Casp3的mRNA表达有明显的抑制作用,而对抗凋亡基因BCL-2的mRNA表达有明显的促进作用。 3.针刺对缺血缺氧脑性瘫痪模型幼鼠受损脑神经细胞的恢复有明显的促进作用,而对受损脑细胞的凋亡有明显的抑制作用。 4.神经生长因子又能进一步促进针刺对缺血缺氧脑性瘫痪模型幼鼠肌力、协调能力和学习记忆能力恢复的治疗作用和对受损细胞的抗凋亡作用。