目的:通过重组人胰岛素样生长因子(rhIGF-1)对体外成骨细胞增殖、骨形态蛋白-2(BMP-2)及核心结核因子(Cbfa1)基因表达的影响研究,探讨rhIGF-1对骨代谢影响的可能机制。
方法:
1、大鼠成骨细胞的原代培养并对其进行鉴定。
2、不同浓度的rhIGF-1 (0、10、50、100 ng/ml)刺激体外培养的大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力。
3、不同浓度的rhIGF-1 (0、10、50、100 ng/ml)刺激体外培养的大鼠成骨细胞,用半定量RT-PCR法检测成骨细胞BMP-2、Cbfa1基因的表达。
4、统计学处理:应用SPSS 13.0统计学软件对实验数据进行方差分析,数据以X±S表示。方差齐,组间比较用LSD-t检验;方差不齐,组间比较用Dunnett T3法检验。P<0.05差异有统计学意义。
结果:
1、原代培养的细胞经鉴定为成骨细胞。
2、MTT比色法测定培养液OD值,结果显示,随着rhIGF-1浓度增高,各组OD值显著增高,呈浓度依赖性。对照组与实验组,实验组组间比较,均有统计学差异(P<0.05)。
3、通过半定量RT-PCR检测成骨细胞BMP-2和Cbfa1基因表达显示,随着rhIGF-1浓度增高,使成骨细胞表面BMP-2和Cbfa1基因表达升高,光密度比值明显增加,且都呈剂量依赖性变化。对照组与实验组,实验组组间比较,均有显著性统计学差异(P<0.01)。
结论:
1、rhIGF-1促进成骨细胞增殖。
2、rhIGF-1可增加BMP-2和Cbfa1基因的表达。
3、rhIGF-1可能通过增加BMP-2和Cbfa1基因的表达,促进成骨细胞的增殖、分化及成熟。