生姜醇提取物对人体肺腺癌细胞（A549）增殖和凋亡的影响及其机制的研究

目的:研究生姜醇提取物(Zingiber officinale)对人肺腺癌细胞(A549)(Human Adenocarcinoma 549)增殖和凋亡变化的影响,并探讨生姜醇提取物抑制A549细胞增殖及诱导凋亡发生的机制。 方法:本研究实验组用浓度为10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L生姜醇提取物分别处理A549细胞24h,对照组为未经生姜醇提取物处理A549细胞。1. MTT比色法检测A549细胞增殖能力;2.光镜观察细胞的生长情况、形态学改变;3.原位末端TdT酶标记技术(TUNNEL)检测细胞凋亡的情况;4.免疫细胞化学法(SP)检测细胞Cytochrome C (Cyt C)蛋白表达;5.流式细胞仪法检测罗丹明123染色后细胞荧光强度以确定线粒体膜电位变化;6.流式细胞仪法检测细胞凋亡情况。 结果: 1.MTT比色法结果显示实验组抑制率分别为14.87%、24.72%、38.21%,与对照组(0.04%)比较抑制率明显增加,均有极显著差异(p<0.01);并随生姜醇提取物浓度增高而明显增加,各实验组之间的两两比较也有极显著差异(p <0.01);2.光镜观察对照组细胞生长正常,凋亡细胞少见,而实验组细胞生长疏散,凋亡细胞的比例增加,程度随生姜醇提取物浓度增高而加重,尤以40μmol/L作用24h最明显;3. TUNNEL检测凋亡细胞指数实验组分别为9.36%±0.82%、13.74%±1.15%、19.17%±1.4%,与对照组(4.81±0.36%)比较,均有极显著差异(p<0.01);并随生姜醇提取物浓度增高而明显增加,各实验组之间的两两比较也有极显著差异(p <0.01);4.免疫细胞化学法(SP)检测细胞Cyt C蛋白表达水平实验组分别为0.23±0.03、0.27±0.06、0.32±0.07,与对照组(0.15±0.02)比较均有显著差异(p<0.05);5.流式细胞仪法检测罗丹明123染色后细胞线粒体平均荧光强度实验组分别为24.78±3.88、36.47±5.74、47.89±6.92,与对照组(16.41±2.32)比较均有极显著差异(p<0.01);6.流式细胞仪检测细胞凋亡率实验组分别为9.87%±1.86%、12.54%±2.12%、18.39%±1.98%,与对照组(0.17±0.03%)比较,均有极显著差异(p<0.01)。 结论:1.生姜醇提取物能抑制人肺腺癌细胞的增殖,其作用呈明显剂量依赖性,即随剂量的增加而抑制率增加。 2.生姜醇提取物可明显降低人肺腺癌细胞线粒体膜电位。免疫细胞化学分析发现A549细胞中Cyt C的表达随生姜醇提取物浓度的升高而增强。表明生姜醇提取物可抑制人肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡,其机制与降低线粒体膜电位继而诱导人肺腺癌细胞凋亡有关。