蒙药蓝盆花血清药理学、血清指纹图谱和主要成分药代动力学研究

目的明确蒙药蓝盆花（Flos Scabiosa,FS）醇提物最大给药量;研究蓝盆花保肝药效;探讨蓝盆花保肝药效物质基础,推测活性化学成分,筛选FS质量标记物（Q-marker）候选物。方法及结果（1）急性毒性试验研究:采用经典的急性毒性试验方法评价FS醇提物毒性情况,结果发现,在最大浓度最大体积给药后小鼠未出现死亡;无法给出半数致死量(LD50),可给出最大给药量为198.88 g（生药）/kg,等于成人临床等效剂量的145.70倍,认为该剂量下FS醇提物无明显毒性。（2）FS血清药理学研究:采用FS血清药理学评价方法,用H2O2诱导肝细胞氧化损伤模型,MTT法检测不同时间点含药血清对细胞存活率的影响,结果发现,除4hr,6 hr含药血清外,其余时间点含药血清组的肝细胞存活率均明显升高（P<0.001）,其中1.5 hr含药血清组细胞存活率最高,该项研究说明FS含药血清对H2O2诱导的肝损伤细胞具有保护作用。（3）FS血清指纹图谱的建立:采用HPLC-Q-Exactive MS建立血清指纹分析方法,以健康Wistar大鼠为供体,灌胃给药,制备15个批次FS含药血清,运用上述的分析方法建立含药血清指纹图谱,数据经预处理后,经SIMCA-P12.0进行模式识别,多维统计分析,经无监督主成分分析（PCA）发现,与空白组比较,15个批次药材聚集良好,说明FS共有模式下各个批次药材之间相似度良好;采用系统聚类分析（HCA）将15批药材血清指纹图谱分为三类;通过相关文献报道及标准品对照等方式,共确定18个入血原型成分。（4）基于“经时谱-效关系”探究FS保肝作用药效物质基础:基于血清药理学结果及血清指纹图谱分析方法,利用灰色关联度法分析氧化损伤肝细胞存活率与不同时间点含药血清各成分峰面积的相关性。结果表明,13种成分与保肝活性关联度均大于0.75,说明这些成分均具有不同程度的保肝作用,其中关联度大于0.8的成分有3,5-二咖啡酰基奎宁酸、对香豆酸、香叶木素、芹菜素、对羟基苯甲酸,推测这些成分可能表现出相对较高的保肝活性。（5）FS中13种成分在健康与急性肝损伤状态下药代动力学比较研究:将血清指纹图谱分析方法应用于健康和CCL4致急性肝损伤大鼠给药后13种成分的药动学比较研究。实验结果表明,急性肝损伤状态下可显著影响蓝盆花各成分的体内吸收代谢过程,且不同成分药动学参数变化趋势有一定的差异性。与正常大鼠比较,模型大鼠体内3,5-二咖啡酰基奎宁酸、新绿原酸、对香豆酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸、秦皮乙素最大血药浓度（Cmax）、药时曲线下面积（AUC）高于正常大鼠,说明其体内暴露量增加,在肝损伤状态下这些成分的血浆药物浓度增加,可以在较低给药剂量下获得所需的药效,故此推测这几种成分为保肝活性成分。结论明确了FS醇提物最大给药剂量;证实FS醇提物的含药血清具有保肝作用;建立了15批FS血清指纹图谱,表征了FS口服给药后吸收入血情况,同时借助灰色关联度法分析保肝活性的谱-效关系。明确了正常-急性肝损伤状态下FS入血原型成分的药代动力学行为差异。本课题为阐述FS蒙医临床保肝作用的药效物质基础,进一步确定FS质量标记物（Q-marker）候选物、临床用药安全性提供参考,为FS现代化研究提供了科学依据,推动该药材的深层次开发利用。