牡蛎糖原的提取与抗疲劳活性研究

本论文旨在通过对牡蛎糖原分离提取方法、分子结构及其生理活性的研究,开发牡蛎糖原保健品。本论文对牡蛎肉进行了成分分析,着重研究了牡蛎糖原的分离提取,分子结构、以及抗疲劳生理活性,并进行了牡蛎糖原生产工艺研究。 采用热碱提取糖原,糖原的提取率为57.2%,冷冻干燥产品为白色粉末,含糖91.10%,蛋白质2.06%。高效凝胶过滤色谱（HPGFC）分析表明,制备得到的牡蛎糖原的相对分子质量大约为130万Dalton,与凝胶过滤色谱得到的牡蛎糖原相对分子质量在数百万至数千万之间的结果吻合。气相色谱测定结果表明,牡蛎糖原只含有葡萄糖残基,是一种均一多糖。 应用酶法研究了牡蛎糖原的精细分子结构。结果表明,牡蛎糖原的分子结构参数——平均链长、外链和内链平均长分别为13,9和3;用异淀粉酶和普鲁兰酶对牡蛎糖原的β—极限糊精进行了顺序脱支,结果表明,牡蛎糖原的A,B链比为0.88:1.0,分支化度为1.88。 比较了五种酶对牡蛎肉蛋白质水解提取糖原的效果。结果表明,胃蛋白酶效果最佳,糖原的溶出率达到了84.6%;通过单因素实验优化得到胃蛋白酶作用牡蛎肉的优化作用条件为pH4.0、50℃、4hr、E/S=1600U/gPro。在此条件下水解液中的糖原溶出率为91.56%,蛋白质水解度为24.06%。 将离心后的牡蛎肉胃蛋白酶水解液进行超滤（截留分子量10000）处理,得到了主要含糖原的溶液。以糖原得率为指标得到乙醇沉淀糖原的优化工艺条件:应用3倍体积95%乙醇沉淀糖原,沉淀中糖原得率为68.8%。将沉淀干燥得到糖原粗产品。糖原粗产品中糖原含量为68.74%,蛋白质含量为15.89%,脂肪含量为8.65%,灰分含量为1.62%,水分为4.99%。糖原产品中含有丰富的对人体有益的矿物质如铁,锌,锰,钙。 将牡蛎糖原按10、20、50mg·kg-1·d-1叫分别灌喂小鼠,进行抗疲劳实验。结果表明,牡蛎糖原能显著地增加小鼠肌糖原、肝糖原储备量;提高运动前、后血液乳酸脱氢酶总活力;降低小鼠剧烈运动后血尿素氮增加量,并加快运动后血尿素氮的清除速率。这表明牡蛎糖原对提高机体的负荷运动适应能力、抗疲劳和加速疲劳消除具有十分明显的作用。但是,并非剂量越大效果越好,在三个试验剂量中,20mg·kg-1·d-1叫剂量组效果最佳。