白扁豆多糖防治酒精性肝病的实验研究

目的:观察白扁豆多糖对酒精性肝病大鼠的肝组织形态、血清及生化指标的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法:90只雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、美他多辛阳性对照组、白扁豆多糖低、中、高剂量组（n=15）。除正常组外,其他组均用高度白酒灌胃加高脂饲料喂养制造酒精性肝病模型。在白扁豆多糖低、中、高剂量组及美他多辛组白酒灌胃前2h,分别给予白扁豆多糖0.5 g·kg-1、1.0 g·kg-1、2.0 g·kg-1及美他多辛0.09 g·kg-1灌胃。正常组每日喂养普通饲料,其余组喂养高脂饲料。10周后处死所有大鼠,取血和肝脏。1.检测白扁豆多糖对ALD大鼠的防治作用:称取肝脏湿重检测大鼠肝脏指数;HE染色观察大鼠肝脏组织病理变化;用微板法检测大鼠血清AST、ALT含量,用酶标比色法检测TG、TC的含量;2.探讨白扁豆多糖防治ALD大鼠的抗氧化机制:用黄嘌呤氧化酶法检测大鼠肝组织SOD活性、用比色法检测GSH-Px的活性,用硫代巴比妥酸法检测MDA的含量;分别采用Western Blot法RT-PCR法及测定CYP2E1的蛋白表达量和CYP2E1mRNA相对表达量。结果:1.肝指数检测结果:模型组为2.731±0.0681,比正常组（2.020±0.0987）显著升高（aP<0.05）;白扁豆低、中、高剂量组为2.431±0.0927、2.436±0.1885、2.206±0.2039,均比模型组显著降低（bP<0.05）,比美他多辛组（2.693±0.2213）也有所降低（cP<0.05）。2.HE染色结果:正常的肝细胞形态正常,边界清晰,沿汇管区呈放射状整齐排列;模型组中大鼠肝细胞边界模糊,胞浆中含有许多大小不等的脂肪空泡,汇管区可见不同程度淋巴细胞浸润;与模型组相比,白扁豆多糖组中大鼠肝细胞内的脂肪空泡数明显减少,且细胞形态有所改善,尤以其高剂量组与正常组的细胞状态最为接近,美他多辛组细胞形态与模型组接近。3.血清ALT含量:正常组为（45.25±4.652）U/L;模型组为（97.13±14.211）U/L,比正常组显著升高（aP<0.05）;白扁豆低、中、高剂量组为（66.63±7.050）u/l、（70.00±11.36）u/l、（64.25±7.451）u/l,均比模型组显著降低（bp<0.05）;美他多辛组为（72.75±7.517）u/l,白扁豆多糖组与其无明显区别（cp>0.05）。4.ast含量:正常组为（125.4±7.94）u/l;模型组为（211.6±17.18）u/l,比正常组显著升高（ap<0.05）;白扁豆低、中、高剂量组为（157.3±17.32）u/l、（155.6±8.749）u/l、（153.8±13.05）u/l,均显著低于模型组（bp<0.05）;美他多辛组为（187.9±12.97）u/l,白扁豆多糖组均比其降低（cp>0.05）。5.tg含量:正常组为（0.2213±0.0449）mmol/l;模型组为（1.2780±0.3924）mmol/l,比正常组显著升高（ap<0.05）;白扁豆低、中、高剂量组为（0.4163±0.0872）mmol/l、（0.5738±0.1073）mmol/l、（0.3750±0.1530）mmol/l,比模型组均显著降低（bp<0.05）;美他多辛组为（0.752±0.0604）mmol/l,白扁豆低、高剂量组比其显著降低（cp<0.05）。6.tc含量:正常组为（1.594±0.2495）mmol/l;模型组为（3.213±0.4646）mmol/l,比正常组显著升高（ap<0.05）;白扁豆低、中、高剂量组为（2.619±0.3818）mmol/l、（2.459±0.3321）mmol/l、（2.284±0.4070）mmol/l,均比模型组显著降低（bp<0.05）;美他多辛组为（2.556±0.2590）mmol/l,白扁豆多糖组与其无明显区别（cp>0.05）。7.sod活性:正常组为（97.27±6.279）u/mgprot;模型组为（72.75±6.964）u/mgprot,比正常组显著降低（ap<0.05）;白扁豆低、中、高剂量组为（86.38±3.852）u/mgprot、（84.11±4.243）u/mgprot、（86.38±3.852）u/mgprot,均比模型组显著升高（bp<0.05）;美他多辛组为（76.25±3.615）u/mgprot,白扁豆多糖中、高剂量组明显比其升高（cp<0.05）。8.gsh-px活性:正常组为（311.8±4.853）u/mgprot;模型组为（207.9±4.853）u/mgprot,比正常组显著降低（ap<0.05）;白扁豆低、中、高剂量组为（231.1±4.970）u/mgprot、（250.1±5.194）u/mgprot、（271.1±6.490）u/mgprot,均比模型组显著升高（bp<0.05）;美他多辛组为（236.4±7.652）u/mgprot,白扁豆中、高剂量组比其显著升高（cp<0.05）。9.mda含量:正常组为（1.088±0.2997）nmol/mgprot;模型组为（3.251±0.2777）nmol/mgprot,比正常组显著升高（ap<0.05）;白扁豆低、中、高剂量组为（2.511±0.3295）、（1.901±0.3464）、（0.937±0.2615）nmol/mgprot,比模型组均显著降低（bP<0.05）;美他多辛组为（2.825±0.1669）,白扁豆中、高剂量组比其明显降低（cP<0.05）。10.Western Blot检测结果:正常组为0.1667±0.0103;模型组为0.8583±0.0204,比正常组显著升高（aP<0.05）;白扁豆低、中、高剂量组为0.3051±0.0327、0.7933±0.0163、0.2351±0.0243,比模型组均显著降低（bP<0.05）;美他多辛组为0.5202±0.0211,白扁豆低、高剂量组比其明显降低（cP<0.05）。11.PCR检测结果:正常组为0.8517±0.0263;模型组为1.160±0.0089,比正常组显著升高（aP<0.05）;白扁豆低、中、高剂量组为1.017±0.0237、1.023±0.0345、0.9367±0.0175,比模型组均显著降低（bP<0.05）;美他多辛组为1.201±0.0209,白扁豆低、高剂量组比其明显降低（cP<0.05）。结论:1.本实验采用白酒灌胃加高脂饲料喂养的造模方法可使得大鼠出现ALD的相关临床表现;2.白扁豆多糖可降低ALD模型大鼠的肝指数和血清中ALT、AST、TG、TC的水平,并可改善肝组织病理形态,说明其对ALD损伤的肝组织具有一定的保护作用。3.白扁豆多糖可以上调SOD、GSH-Px的表达,同时下调MDA的表达水平,并抑制CYP2E1蛋白和基因的表达,说明白扁豆多糖能够对ALD起到防治作用,其可能的机制在于白扁豆多糖可以通过微粒体乙醇氧化途径抗脂质过氧化损伤。