益气补肾方药对自然衰老和肾虚致衰老小鼠免疫衰老的防治研究

衰老是生命的自然过程，衰老机体表现为对外界刺激因子的适应能力降低，患感染性疾病和肿瘤的机会增加。以上事实主要归因于随机体衰老，免疫功能出现进行性下降，即免疫系统老化或免疫衰老，尤其是T细胞功能出现严重缺陷。免疫机能受损后，又会导致机体容易出现多种疾病，加速衰老的进程，严重影响老年人的健康。研究免疫衰老的分子机制及延缓免疫衰老的方法，对健康地渡过老年阶段有重要意义。 祖国医学认为，衰老与机体肾中精气的虚衰有关，温补肾虚的中药可减缓衰老的进程。通过生理学和生物化学研究表明，补肾药可通过调节内分泌、免疫及生殖系统的功能来延缓衰老。 衰老模型是研究延缓衰老方法及其作用机制的关键一环，直接关系到实验结果的实际意义。本研究选用20月龄的老龄小鼠作为自然衰老模型，同时给10月龄(接近衰老)小鼠注射醋酸可的松，造成小鼠，肾虚，作为“肾虚致衰老”模型。 金匮肾气方为我国传统补肾方药，该方滋补肾虚、延缓衰老的作用已被世人所公认。人参和黄芪足很好的补气药，同时还具有促进淋巴细胞增殖和提高细胞因子IL-2活性的作用。在补肾药中加入适量的人参和黄芪，可更好地增强其补肾效果，把该方定名为益气补肾方药(strengthening vital energy combined with tonifying kidney，SVE plusTK)。 与衰老有关的免疫功能变化，主要由T细胞功能的改变所致。T细胞功能的改变可能归因于多种综合因素的异常：T细胞增殖、细胞因子的产生、黏附分子的表达、参与调控多种免疫分子表达的转录因子NF-κB的活性及激活诱导的T细胞凋亡等。 基于上述观点，本研究用自然衰老小鼠和醋酸可的松致肾虚小鼠 中文摘要 为模型，在整体水平，从淋巴细胞增殖、细胞因子和虱附分子基因表 达、T细胞 NF－K B活性、T细胞激活诱导的 T细胞凋亡等方面探讨了 自然衰老和“肾虚致衰老”的免疫学机制，同时，观察并比较了益气、 补肾及益气补肾方药对免疫系统老化的防治作用。目的是系统地探讨 传统中药复方延缓衰老的免疫学机制。 同时，以公认的人胚肺成纤维细胞为衰老模型，在细胞水平观察 了人参的主要成分人参皂贰对细胞增殖活性的调节及作用机制，进一 步证实人参皂贰抗细胞衰老作用，并为益气方药可提高补肾药的作用 提出可靠的证据c研究分以下儿个部分： 回 益气补肾方药调节老龄和肾虚小鼠淋巴细胞增殖、细胞因子IL－2 和ILl 基因表达的研究 给自然衰老和肾虚小鼠灌服益气、补肾和益气补肾方药，经MTT 法观察了不同方药对脾脏淋巴细胞增殖的影响；用胸腺细胞增殖法检 测了ConA诱导的脾脏淋巴细胞几七活性水平；用ELISA方法测定了 脾脏淋巴细胞经ConA、CD3抗体及LPS诱导的几、 水平；同时用 RT干CR的方法观察了脾脏淋巴细胞经 ConA刺激后，细胞因子 IL七和 I［－12 mR＼A的表达，结果如下： 1．1 老龄个鼠脾淋巴细胞经ConA、CD3抗体和 LPS刺激后，增殖 主数明显低 于低 齿＊鼠（p＜0＊ 1）；L－2活性也明显降低（p＜0＊引。同 时经ELISA方5去还观察到，ConA及CD3抗体刺激的老龄小鼠脾脏淋 巴细胞ILl 的产生明显减少k＊．of），而LPS刺激的各组，ILd2 的水平差异不显著。另外，老龄小鼠的几上和 IL＊。RNA表达也比 低龄小鼠分别下降45％禾 42％。 给老龄小鼠灌服益气、补肾及益气补肾方药后，淋巳细胞增殖指 数明显增加一＜0．05或 p＜0刀 1人其中补肾和益气补肾方药对 ConA 诱导的细胞增殖的促进作用显著高于益气方药中＜0刀5卜三种方药都 能显著增加老龄小鼠ConA诱导的脾脏淋巴细胞IL上的活性及ConA 或 CD3抗体诱导的 ILl 2的水平巾＜0刀5或 p＜0刀 1），其中，益气补 肾方药与益气和补肾方药比有显著性差异（均p＜0刀引。问时，三种 方药对IL－2的mRNA表达分别提高19％、67％和 105％；对n－12的mRNA 表达也有促进作用，分别提高 69％、94％和 105％。 中文摘要 1．2 肾虚小鼠脾淋巴细胞增殖能力、k 活性及 IL八 2产生水平均明 显比低龄小鼠下降巾＜0刀1或 p＜0刀5人 IL上 mRNA也比对照降低 24％。 三种方药均可改善LPS刺激的肾虚小鼠脾淋巴细胞增殖低下的状 态，且三种方药的作用没有显著性差异。益气补肾方药对CD3抗体 刺激的脾淋巴细胞的增殖促进作用最明显，与其它方药有显著差异 O＜0刀5卜 益气和益气补肾方药还能明显提高肾虚小鼠脾脏IL＜的活 性水平巾＜0．05人 二者的作用无显著性差异。另外，三种方药均可不 同程度地提高 ConA及 CD3抗休刺激的肾虚小鼠脾脏淋巴细胞 ILIZ 的产生，只有益气补肾方药的作用最显著巾功刀引。 同时，还观察到，三种方药对 IL2 mRNA的表达可分别提高 60％、 100％和 74％。 以上结果提示：从免疫衰老的角度来看，自然衰老和肾虚模型小