超高效液相色谱—质谱联用技术同时检测生物样品中非苯二氮卓类镇静催眠药的方法研究

非苯二氮卓类药物（Non-Benzodiazepines,NBZD）是直接作用于中枢神经系统的抑制剂,属于第三代镇静催眠药。该类药物于二十世纪八十年代后期问世,以唑吡坦（Zolpidem）,佐匹克隆（Zopiclone）,扎来普隆（Zaleplon）为代表,具有镇静催眠、抗焦虑、抗惊厥、肌肉松弛等药理特点,主要用于治疗失眠。这类药物对苯二氮卓受体（BZ）具有特异选择性,具有快速进入睡眠状态,促进深度睡眠,正常睡眠生理结构基本不受影响,醒后无宿醉感等特点。由于本类药物用量少,催眠效果好,起效快,故它在有效满足失眠人群同时,一些不法分子也利用这些新型催眠药实施麻醉抢劫、麻醉强奸、麻醉凶杀、麻醉摘除器官等犯罪活动,该类犯罪事件呈逐年上升趋势。因此有必要建立快速、有效的鉴别分析方法,为临床药物过量、药物滥用的抢救和法庭刑事案件侦破工作中,确定是否服用过此类药物以及服用的是何种药物提供科学证据。超高效液相色谱-质谱联用技术（UPLC-MS/MS）集液相的高效分离能力和质谱的高灵敏度、强结构定性功能于一体,具有专属性强,快速灵敏,准确可靠等优点,成为化学成分鉴定的有力分析工具,本研究采用了UPLC-MS/MS技术建立了非苯二氮卓类镇静催眠药分析方法,测定了血浆及尿样中的唑吡坦、右佐匹克隆、扎来普隆,为该类药物的快速鉴定、定量分析提供了一个简便、快速、可靠的方法。第一部分UPLC-MS/MS法同时检测人血浆中唑吡坦、右佐匹克隆、扎来普隆目的:建立一种快速、准确、可同时检测人血浆中非苯二氮卓类镇静催眠药唑吡坦、右佐匹克隆、扎来普隆的分析方法。方法:色谱条件:色谱柱:Waters ACQUITY UPLC HSS T3（1.8μm,2.1×100 mm）;流动相A:0.1%氨水溶液,流动相B:乙腈。梯度洗脱,流速为0.2 m L/min。质谱条件:电喷雾离子源（ESI源）,正离子模式,多反应监测（MRM）;样品用二氯甲烷:正己烷:乙酸乙酯（5:4:1）进行萃取。结果:唑吡坦、右佐匹克隆、扎来普隆在测定浓度范围内有良好的线性关系,相关系数均高于0.9903,线性关系与检测限、精密度与准确度、提取回收率和基质效应、稳定性均符合要求。3种非苯二氮卓类药物唑吡坦、右佐匹克隆、扎来普隆24h内经3次冻融,差异在15%以内,证明被分析物稳定性良好。提取回收率范围为87.4%108.0%,RSD为4.5%14.6%。结论:本法简便、快速、灵敏度高、专属性好,可用于人血浆中唑吡坦、右佐匹克隆、扎来普隆的同时检测。第二部分UPLC-MS/MS法同时检测人尿液中唑吡坦、右佐匹克隆、扎来普隆目的:建立一种快速、准确、可同时测定人尿液中非苯二氮卓类镇静催眠药唑吡坦、右佐匹克隆、扎来普隆的分析方法方法:色谱条件:色谱柱:Waters ACQUITY UPLC HSS T3（1.8μm,2.1×100 mm）;流动相A:0.1%氨水溶液,流动相B:乙腈。梯度洗脱,流速为0.2 m L/min。质谱条件:电喷雾离子源（ESI源）,正离子模式,多反应监测（MRM）;样品用二氯甲烷:正己烷:乙酸乙酯（5:4:1）进行萃取。结果:唑吡坦、右佐匹克隆、扎来普隆的线性关系符合要求,相关系数均大于0.9932,3种被分析物的日内、日间RSD均小于15.0%。其回收率Rev为89.6%109.9%。提取回收率范围为79.8～105.5%,基质效应范围为0.85～1.09。唑吡坦、右佐匹克隆、扎来普隆24h内经3次冻融后的样品与新鲜配制的样品初始浓度差异在15.1%以内,证明被分析物经3次冻融的稳定性良好。唑吡坦、右佐匹克隆、扎来普隆检测限分别是10 pg/m L、500 pg/m L、20 pg/m L,定量限则分别是20 pg/m L、1000 pg/m L、50 pg/m L,此外精密度、准确度、稳定性、提取回收率和基质效应均符合要求。结论:本法简便、快速、灵敏度高、专属性好,可用于人尿液中唑吡坦、右佐匹克隆、扎来普隆的检测。