中国特有植物羊踯躅遗传多样性的ISSR分析

从5个天然居群（金溪、庐山、井冈山、武宁和瑞昌）采集羊踯躅样品,用改良的2×CTAB法从样品叶片中提取基因组DNA,优化了PCR循环参数,建立了ISSR-PCR扩增的最佳反应体系,从167条随机引物中筛选出多态性好且清晰度高的引物,并用筛选出的引物对39个羊踯躅个体的基因组DNA进行扩增,对羊踯躅居群的遗传多样性和遗传结构进行了研究。 实验结果表明用丙酮对样品进行预处理可以提高产物的纯度。ISSR-PCR扩增条件经过优化后确定为在25μι的ISSR-PCR反应体系中,各项因子最适条件为:模板DNA30～45ng/25μι,Mg2+2.0～2.5mmol/l,dNTPs0.1～0.15mmol/l,引物0.3～0.4μmol/l,Taq酶0.5～1.0U;10×PCR buffer 2.5μι,加ddH2O至25μι。其热循环参数为:94℃预变性5min,之后进行30个循环（94℃lmin,55℃30s,72℃2min）,最后72℃延伸7min后在4℃终止反应。 本研究对167条ISSR引物进行了筛选,筛选出多态性好且清晰度高的13条引物用于5个居群39个样本的扩增。结果共检测到196个位点,其中190个为多态性位点,多态性位点百分率（PPB）为96.94%。 根据不同个体的扩增图谱构建了0、1矩阵输入计算机。数据处理结果如下: POPGENE分析表明羊踯躅具有丰富的遗传多样性（H=0.3342,I=0.5007）。Nei’s遗传多样性和AMOVA分析表明,居群间存在有一定的遗传分化（Gst分别为0.5084和0.5320）。由UPGMA聚类分析可知金溪、庐山、井冈山和武宁四个居群聚为一支,瑞昌居群单独作为一支。由Mantel相关性检测可知,居群的遗传距离与地理距离有一定的相关性,但并不显著。 通过对羊踯躅遗传多样性和遗传结构的研究,提出了保护羊踯躅遗传多样性的策略:1.实施就地保护和迁地保护策略;2.建议在居群间进行植株和幼苗移栽,以提高居群间的基因交流,以最大限度保护羊踯躅的遗传多样性;3.保护和重建羊踯躅居群的适宜环境。