紫果西番莲叶抗焦虑药效研究及其机制初探

目的：研究聚酰胺颗粒分离纯化紫果西番莲总黄酮的工艺条件并采用该优化条件对紫果西番莲叶醇提物进行纯化并测定纯化后的紫果西番莲叶醇提物中异荭草素、荭草素和牡荆素中的含量；考察紫果西番莲叶醇提物的抗焦虑作用的药效及其有效剂量；考察紫果西番莲叶醇提物次级分离部位的抗焦虑药效及其有效剂量，并测定总黄酮的含量；研究紫果西番莲叶醇提物及其次级分离部位对高架十字迷宫焦虑模型小鼠GABAA型受体α2亚型和α3亚型mRNA表达的影响。 方法：采用紫外分光光度法测定紫果西番莲总黄酮的含量，通过考察静态、动态吸附实验，筛选了聚酰胺颗粒分离纯化紫果西番莲总黄酮科学合理的工艺条件，以检测波长为350nm，流速1mL·min-1，柱温30℃，以InertsilC18（5μm,4.6mm×250mm）为固定相，乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相的二元梯度洗脱方法测定纯化后的紫果西番莲叶醇提物中异荭草素、荭草素和牡荆素中的含量；采用国际通用的小鼠高架十字迷宫（elevatedplus-mazetest,EPM）焦虑动物模型，观察高中低剂量的紫果西番莲叶醇提物对小鼠的行为的影响，并就各剂量对抗焦虑作用的指标进行分析；采用国际通用的小鼠高架十字迷宫焦虑动物模型，观察紫果西番莲叶醇提物的次级分离部位不同剂量对小鼠的行为的影响，并就其不同部位的不同剂量对抗焦虑作用的指标进行分析，同时采用氯化铝法测定紫果西番莲叶醇提物次级分离部位的总黄酮的含量；行为学结束后取EPM小鼠全脑，提取总RNA，用RT-PCR和Real-TimePCR法对扩增产物进行分析。 结果：聚酰胺对紫果西番莲叶总黄酮有良好的吸附，聚酰胺对西番莲的静态吸附的饱和吸附量为23.14mg/g，其动态吸附分离工艺条件为：上样量为30mL西番莲提取液，纯化先用8BV的水洗脱至无molish反应，然后用12BV的50%乙醇以2BV/h的流速进行洗脱，用聚酰胺纯化后的紫果西番莲叶中的异荭草素，荭草素，牡荆素含量分别为0.957%、0.278%、0.148%；紫果西番莲叶醇提物在200mg/kg/d时并未表现出抗焦虑作用，但在400mg/kg/d、800mg/kg/d时表现出了比较明显的抗焦虑作用；紫果西番莲叶次级分离部位即乙酸乙酯部位、水饱和正丁醇部位以及水部位在100mg/kg、200mg/kg、300mg/kg时也都表现出了比较明显的抗焦虑作用，且其含有的总黄酮的量分别是37.43%、21.62%、6.58%；紫果西番莲叶醇提物在200mg/kg/d不能提高架十字迷宫模型中小鼠脑组织中GABAA受体α2亚型和α3亚型mRNA表达水平，但在400mg/kg/d、800mg/kg/d时能显著提高EPM焦虑小鼠脑组织GABAA受体α2亚型和α3亚型mRNA表达水平，同时300mg/kg/d剂量下的乙酸乙酯部位、水饱和正丁醇部位以及水部位也能显著提高EPM焦虑小鼠脑组织GABAA受体α2亚型和α3亚型mRNA表达水平，从这我们可以推测紫果西番莲叶可能通过增加脑组织GABAA受体量来提高GABAA能的功能从而发挥其抗焦虑作用。 结论：聚酰胺颗粒对紫果西番莲叶总黄酮吸附选择性高，操作简单，可用于紫果西番莲的富集纯化；紫果西番莲叶醇提物具有抗焦虑药效；紫果西番莲叶醇提物次级分离部位表现出了抗焦虑作用，且抗焦虑药效与总黄酮有关；紫果西番莲是通过上调GABAA受体α2亚型和α3亚型mRNA表达水平来发挥抗焦虑作用的。