大黄素作用于大鼠重症急性胰腺炎的分子机理研究

目的： 重症急性坏死性胰腺炎(Severe acute pancreatitis SAP)因其并发症多、病死率高和病情的多变性，长期以来人们为此进行了大量的探索和研究。由于致病危险因素的多样性，疾病过程的复杂性，导致SAP的变化千差万别，更由于发病机制尚不完全清楚，治疗缺少特异有效的药物和手段。而中西医结合治疗SAP取得了较好的疗效，并在这方面进行了成功的探索，SAP经中西医结合治疗后使其病死率从20世纪80年代的70％-85％下降到现在约10％左右。但是由于中药是一复方成分，要想最终成为药品走向世界，实现中药现代化，有必要对其主要成分单体进行SAP的治疗的机理研究，并最终明确其治疗SAP的药理学基础。本课题的目的以大鼠SAP为模型研究中药一金颗粒中主药的有效成分大黄作用的分子机理，以阐明其在中西医结合治疗SAP的作用基础。 方法： (1)采用大鼠被膜下注射5％的硫磺胆酸钠制成大鼠SAP，用一金颗粒干预后，观察其血浆淀粉酶的改变。 (2)用不同剂量的大黄素干预大鼠SAP后，观察其药物的随着时间的改变，血浆中IL-1β、TNF-α、IL-8和IL-10的改变时效关系和量效关系。 (3)RT-PCR方法检测大黄素干预后肺组织IL-1α、IL-6和IL-10表达的变化。 (4)用免疫组化的方法检测大黄素干预大鼠实验性SAP后，器官肝肺小肠P-选择素的改变，，ICE(在肺组织表达的改变。 (5)基因芯片方法分析在SAP模型下用大黄素干预后其基因表达谱的改变。 结果： (1)中药一金颗粒有很好的降低大鼠重症急性胰腺炎的血清淀粉酶；减轻胰腺局部的炎症 (2)中药一金颗粒的有效成分大黄素有较好的降低大鼠重症急性胰腺炎的血清淀粉酶，能改变胰腺外器官的炎症反应，减轻肺组织，肝组织的充血，水肿等炎性反应。同时降低血浆中致炎因子IL-1β、TNF-α和IL-8的浓度，而升高抑炎因子IL-10的浓度。 (3)大黄素可使大鼠SAP时肺组组织IL-10的RNA的表达增加，而IL-1β、IL-6的表达降低，且有一定的时效关系。 (4)免疫组化结果显示，大黄素给予后在大鼠SPA时肺组织的ICE表达降低，而P-选择素在肝、肺、肠的表达也降低。 (5)基因芯片检测发现，给予大黄素治疗大鼠SAP，用RNA进行基因测定，发现其基因表达有变化的约35个基因，其中上调基因有7个，下调基因有28个，这些差异基因与细胞因子和生长因子受体、细胞凋亡、DNA损伤／修复，离子通道、信号传导、转录／转录因子等密切相关。 结论： (1)中药一金颗粒对大鼠重症急性胰腺炎有降低其胰淀份酶的治疗作用。 (2)一金颗粒的主药大黄的主要成分大黄素可降低大鼠重症急性胰腺炎血浆淀粉酶，并对大鼠SAP时全身炎症的肺、肝、小肠粘膜有保护作用，其机制可能与负性调节促炎因子IL-1β、TNF-α和IL-8的表达，正性调节抑炎因子IL-10有关。也可能与负性调节P-选择素在肺、肠、肝的表达有关。 (3)大黄素可减轻SAP时肺损伤症状，其机制与大黄素在RNA水平下调肺组织炎性细胞的IL-1β、IL-6的表达，上调IL-10的表达，在蛋白质水平上下调ICF的表达有关。 (4)大黄素对大鼠SAP干预后，有明显的差异基因表达变化，说明大黄素的作用与基因的调节有关。